应用Real-time PCR检测红鹿感染牛型结核杆菌后IFN-γ和IL-4mRNA的表达

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目的:一是揭示红鹿抗结核杆菌感染的免疫反应途径。二是探索应用TaqManReal-time PCR技术定量测定红鹿外周血单个核细胞中细胞因子mRNA表达水平的可行性。 方法:实验中共采用20只红鹿,其中一组10只对牛型结核杆菌(Mycobacterium boris,M.bovis)有抵抗力,另一组10只对M.bovis敏感。两组各取5只接种活的卡介苗(BCG),余下5只不接种卡介苗。接种卡介苗八周后所有的动物都注射有毒力的M.bovis,在注射M.bovis四周前(即接种卡介苗四周后)以及六周后分别收集外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC).PBMC在与美洲商陆原(Pokeweed Mitogen,PWM)共育后测定细胞因子Interferon—γ(IFN—γ)和Interleukin—4(IL—4)mRNA的表达水平。mRNA的定量测定是在ABI PRISM 7700序列检测系统上应用TaqMan Real-time PCR技术进行的。 结果:1.在红鹿接受M.bovis刺激前后PBMC中IFN—γ和IL—4mRNA的表达水平有显著差异。2.本试验建立了应用TaqMan Real-time PCR技术定量检测红鹿PBMC中细胞因子mRNA表达水平的方法。 结论:红鹿抵抗结核杆菌感染的免疫反应是复杂的混合细胞反应型,Th1,Th2细胞反应均加强。Real-time PCR是一种敏感性强、特异性好、快速简便的mRNA定量检测方法。
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