10600nm CO2点阵激光和维A酸对Wistar大鼠嫩肤作用的比较和机制研究

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiehao2008
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目的:比较10600nm CO2点阵激光照射和外用维A酸制剂对Wistar大鼠皮肤的组织学和超微结构改变。初步探讨10600nm CO2点阵激光和维A酸治疗效果的长效性和时效性,为临床实践提供参考。方法:选取45只雌性Wistar大鼠,随机分为9组,将背部皮肤作为实验观察区,进行脱毛后用十字形标记线将观察区分为四部分:近头端左侧为正常对照组(A区),近尾端左侧为维A酸组(B区),近尾端右侧为联合治疗组(C区),近头端右侧为点阵激光组(D区)。C区和D区于实验开始时照射10600 CO2点阵激光1次,参数设置:能量15mJ,能量密度5%,频率300Hz,图形为方形,10mm×10mm;激光照射完毕后B区和C区开始每日外擦0.025%维A酸乳膏,持续3周。分别在第3天、第1-8周分批处死9组大鼠,每组大鼠取背部4区皮肤组织,在组织切片镜下检测真皮厚度,采用羟脯氨酸试剂盒检测组织中羟脯氨酸含量,Real-time PCR法检测Ⅲ型前胶原mRNA的表达。3周时在透射电镜下观察大鼠皮肤的超微结构改变。结果:①自3周至8周,各治疗组(B、C、D)Wistar大鼠真皮厚度较正常对照组(A)增加(P<0.05); 2~4周点阵激光组(D)与维A酸组(B)比较真皮厚度明显增加,差别有统计学意义(P<0.05); 2~6周联合治疗组(C)比维A酸组(B)真皮厚度明显增加(P<0.05)。②第3天各治疗组(B、C、D)羟脯氨酸含量较正常组下调,1周时各治疗组(B、C、D)羟脯氨酸含量较正常组(A)升高并持续上调,联合治疗组(C)和点阵激光组(D)于第5周达最大值,维A酸组(B)于第6周达最大值;8周时联合治疗组(C)羟脯氨酸含量仍明显高于其他各组(P<0.05);点阵激光组(D)和维A酸组(B)羟脯氨酸含量于照射后1~4周差别有统计学意义(P<0.05);③3天~1周时点阵激光组(D)Ⅲ前胶原mRNA的表达较正常对照组(A)下调;1周后各治疗组(B、C、D)的Ⅲ前胶原mRNA的表达均较前上升,联合治疗组(C)上升最为明显,并且达峰值最快(3周达峰值,5.61±0.7);④.3周时观察各分区大鼠的皮肤超微结构改变,透射电镜下显示单位面积内各治疗组(B、C、D)胶原数量比正常对照组(A)明显增多,胶原纤维排列方式更加紧致密集。结论:维A酸制剂和10600nm CO2点阵激光均具有促进Wistar大鼠皮肤胶原增生和重构的作用,可维持起效至少8周;与维A酸制剂相比,10600nm(C02点阵激光的嫩肤作用起效迅速,维持时间较短;联合应用C02点阵激光和维A酸制剂能够产生良好的协同作用。目的:比较照射10600nm CO2点阵激光和外用维A酸制剂对Wistar大鼠皮肤组织中miR-29a、Akt、TGF-β的mRNA表达水平以及磷酸化的Akt和TGF-β蛋白的表达,从分子水平上进一步研究miR-29a/Akt/TGF-β信号通路诱导皮肤胶原合成的机制。方法:取10只雌性Wistar大鼠,将大鼠背部皮肤脱毛后,按十字方式将背部皮肤平均分为四份,并用苦味酸进行标记。近头端左侧为正常对照组(A区),近尾端左侧为维A酸组(B区),近尾端右侧为联合治疗组(C区),近头端右侧为点阵激光组(D区)。C区和D区于实验开始第1天照射10600 nm CO2点阵激光1次,参数设置:能量15mJ,能量密度5%,频率300Hz,图形为方形,10mm×10mm;激光照射完毕后于B区和C区每日外擦0.025%维A酸乳膏,持续3周。在第3周时处死大鼠,取每只大鼠背部4区皮肤组织,分别应用Western blot方法检测Wistar大鼠皮肤中磷酸化的Akt和TGF-β蛋白的表达,Real-time PCR方法检测Wistar大鼠皮肤组织中miR-29a、Akt、TGF-β的mRNA表达水平。结果:①Real-time PCR检测结果表明,各治疗组Wistar大鼠皮肤组织中Akt、TGF-β的mRNA表达水平均较正常对照组明显得到升高,miR-29a的mRNA表达水平则低于对照组。以联合治疗组的差异性最为显著(P<0.05)。②第3周时,各治疗组中大鼠皮肤组织磷酸化的Akt和TGF-β蛋白的表达水平明显高于对照组,联合治疗组的增加最为显著。结论:维A酸制剂和CO2点阵激光均具有激活miR-29a/Akt/TGF- β信号通路的作用;miR-29a/Akt/TGF-β信号通路可能在促进胶原合成的增生中发挥作用;联合应用CO2点阵激光和维A酸制剂对miR-29a/Akt/TGF- β信号通路的激活作用最为显著。
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