猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是一种猫和部分猫科动物的病原体,是杯状病毒科成员。该病毒核酸为单股正链RNA,无囊膜,直径30～40nm。感染FCV的猫表现为口腔溃疡、上呼吸道感染、慢性口炎、鼻炎、结膜炎、肺炎或跛行等临床症状。高致病性FCV可引起动物的全身性感染,并引起死亡。感染FCV的猫一部分恢复健康,另一部分成为无症状的病原携带者。出现这样的患病猫,是由于病毒的变异,逃避宿主的免疫。FCV病疫苗已应用多年,有效地降低了临床疾病的发病率。然而,该疫苗并不能完全防止易感动物被感染,接种疫苗的动物仍然可以成为持续性感染源,污染环境,造成疾病的流行。目前此病呈世界性分布,已从世界上许多国家和地区包括我国的猫和猎豹中分离到FCV,对猫和珍稀动物野生的猫科动物健康造成了很大的威胁。FCV的检测方法有病毒分离鉴定和血清学试验等多种方法,对分离的病毒可进行电镜检查、RT-PCR、荧光定量PCR鉴定或与已知抗血清作中和、琼脂扩散、免疫荧光或酶联免疫法进行鉴定。上述诊断方法均存在一定的缺陷。实时荧光定量PCR方法具有敏感性高、特异性强、操作简易等优点,应用于对FCV的检测及鉴定,为有效控制该病的传播提供了有力的技术支持。FCV病毒有3个开放阅读框,FCV基因变异率高。本实验在设计引物与探针时,选择编码衣壳蛋白ORF2的保守B区,以保证可以检测出变异株。根据GenBank中编码FCV衣壳蛋白ORF2的的保守序列,设计并合成了1对引物和相应的TaqMan探针,建立了快速检测FCV的荧光定量PCR方法。对该方法的反应体系和反应条件进行优化,建立标准曲线,开展了特异性、敏感性和重复性试验,并对临床疑似样品进行了检测。结果表明,该方法检测cDNA的线性关系为0.992,线性范围为2.26×1011～2.26×101拷贝/uL,能检出FCV而其它猫相关病毒检测结果为阴性,批内重复性试验变异系数为2.158%。采用本实验建立的FCV荧光定量PCR方法检测24份病料,阳性3份、阴性21份,与病毒分离结果完全符合。由此说明,本实验建立的FCV荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,具有潜在的应用价值。