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背景糖尿病是一种多因素引起的复杂的代谢性疾病，发病率高、危害大，其中1型糖尿病和2型糖尿病是两个主要类型，因二者发病机制和治疗措施不同，目前糖尿病防治指南规定需予区分。1型糖尿病主要是由自身免疫性破坏胰岛β细胞导致胰岛素绝对缺乏而引起，其特征之一表现为外周血中出现针对胰岛β细胞相关分子的自身抗体，这些自身抗体作为检测标志物，为糖尿病分型诊断提供了一个有效的解决途径。目前临床常用的胰岛素自身抗体（IAA）、谷氨酸脱羧酶自身抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体（IA-2A）在1型糖尿病中的阳性情况、持续时间和存在强度各具特点，单个指标的诊断价值尚存在缺陷。近年来新发现的锌转运体8自身抗体（ZnT8A）具有较好的检测敏感性和特异性，联合检测IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A能够使不同的自身抗体优势互补，综合提高诊断效能。但常见的放射配体法和酶联免疫法主要对应单个项目的测定，以微孔板为反应载体存在板间差异和孔间差异问题，难以达到在同一条件下同时检测四项指标，导致联合检测成本高、耗时长、操作复杂、差异难控制等问题，使得该工作在临床开展受限。目的以固相膜免疫反应原理为基础，建立糖尿病自身抗体斑点金免疫渗滤检测法，构建联合检测IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A的血清学诊断试剂盒，使四项指标能够在同一条件下一次同时完成检测，有效减少检测差异并提高检测效率，为糖尿病自身抗体联合检测提供一种快速简便、准确高效且价廉易推广的新途径。方法制备胶体金并标记链霉亲和素作为显色探针，将重组人胰岛素、谷氨酸脱羧酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和锌转运体8抗原点样于硝酸纤维素膜上，设计生物素-链霉亲和素级联信号放大反应体系，探索并确定最优检测条件，建立糖尿病自身抗体斑点金免疫渗滤检测法。将免疫渗滤装置和配套试剂组成免疫渗滤联检试剂盒，初步应用于检测临床病例和健康对照标本，评估试剂盒性能。结果1、自制的18nm胶体金经透射电镜鉴定具有良好分散性和均一性，以其成功标记链霉亲和素并获得高速离心纯化。2、筛选确定了斑点金免疫渗滤法检测IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A的最适反应条件，构建完成了免疫渗滤联检试剂盒并优化其制备工艺。3、应用本试剂盒检测42例T1DM敏感性为66.7%，检测100例健康对照特异性为97%。与ELISA法比较在自身抗体阳性检出率上无显著差异（P>0.05）。采用3个批次的试剂盒检测结果一致，4℃干燥保存10周内检测性能稳定。结论成功制备一卡四检（IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A）的糖尿病自身抗体免疫渗滤联检试剂盒，初步应用具有良好检测性能和实用价值。