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目的:采用HepG2细胞葡萄糖消耗模型探讨卷柏的降糖作用以及降糖的活性部位;进一步研究主要有效成分体外降糖特点以及对胰岛素抵抗是否有改善作用。
方法:首先采用HepG2细胞葡萄糖消耗实验比较卷柏水提物及水提物上D101大孔吸附树脂所得不同洗脱部位的降糖活性,筛选出降糖作用最佳部位,并结合卷柏HPLC色谱图指认该部位主要成分。根据活性部位所含化合物的种类、性质改进提取方法,结合HepG2细胞葡萄糖消耗实验,与卷柏水提活性部位比较降糖活性,采用HPLC色谱图进行成分比对,确认提取方法和主要有效成分;检测主要有效成分对HepG2细胞培养基中葡萄糖消耗作用;建立胰岛素抵抗细胞模型,采用该细胞模型初步探讨卷柏有效成分降糖的机理。
结果:(1)卷柏水提取物大孔吸附树脂50%乙醇洗脱部位和70%乙醇回流提取物具有较高的降糖活性,结合建立的卷柏HPLC色谱图,提示卷柏降糖作用为黄酮类化合物,穗花杉双黄酮为主要的降糖活性成分。(2)在对穗花杉双黄酮体外降糖活性实验中发现,中浓度葡萄糖(15.3mmol/L)培养基条件下10μg/ml穗花杉双黄酮降糖作用最强,与胰岛素同时用药时具有明显的协同降糖作用。(3)建立了稳定可靠的胰岛素抵抗HepG2细胞模型,即将HepG2细胞置于10-6mol·L-1的胰岛素中48h,HepG2细胞对胰岛素的作用产生抵抗,该特性可维持48h。(4)穗花杉双黄酮剂量为10μg/ml时,能够促进HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗,与胰岛素具有一定的协同效应,并且在胰岛素抵抗细胞模型复制过程中,向培养基中加入剂量为10μg/ml穗花杉双黄酮,细胞的葡萄糖消耗量明显提高。
结论:由HepG2细胞葡萄糖消耗实验结合卷柏HPLC图谱色谱峰指认的结果,提示卷柏降糖作用的物质基础为黄酮类化合物,穗花杉双黄酮为主要有效成分。穗花杉双黄酮可通过肝细胞发挥降糖作用,在一定条件下可明显地促进HepG2纽胞的基础葡萄糖消耗、胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗,增加胰岛素的敏感性,提示对细胞水平的胰岛素抵抗病理状态的形成与进展有一定的改善作用。本实验提示卷柏发挥降糖作用为多成分综合作用的结果,穗花杉双黄酮是卷柏降糖作用的主要活性成分之一,对卷柏降糖活性的物质基础还有待进一步深入研究。