鱼类细胞系作为一种重要的研究工具已经被广泛地应用于病毒学、环境毒理学、鱼类资源保护与遗传育种、内分泌学、发育生物学以及生理学等研究中[1]。自Wolf和Quimby(1962)建立的第一个鱼类细胞系-虹鳟鱼生殖腺细胞系RTG-2以来,迄今已建立了包括淡水鱼类、海水鱼类和溯河洄游性鱼类的不同组织来源包括鳍条、皮肤、腮、肝脏、肾脏、脾脏、性腺、胚胎等的细胞系超过400余株。相较于活体鱼,鱼类细胞系作为实验体系有着如下的优点:不仅材料容易获得,降低了实验成本,还具有重复性好,实验条件可以精确控制等优势。因此,鱼类细胞系不仅对于基础研究,还是对于实际应用都具有重要应用价值。大菱鲆属辐鳍鱼纲(Actinopterygii)、鲽形目(Pleuronectiformes)、鲽亚目(Pleuronectoidei)、菱鲆科(Scophthalmidae),是当前欧洲和亚洲被广泛养殖的经济鱼类之一。目前见诸报道的大菱鲆细胞系有胚胎细胞系、鳍细胞系、头肾细胞系、心脏细胞系,尚未见其脑细胞系和精巢细胞系建立的报道。本研究通过组织块培养法,以大菱鲆脑组织为材料,建立了大菱鲆脑细胞系(S.maximus brain cell line,SMB);以大菱鲆精巢组织为材料,建立了大菱鲆精巢细胞系(S.maximus testis cell line,SMT)。培养SMB和SMT细胞系所用的培养基均是在DMEM/F12基本培养基中添加了Hepes(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesm Lfonic acid)、抗生素(青链霉素)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和β-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-ME)所配成的完全培养基。SMB细胞由上皮样细胞和成纤维样细胞构成,至今已传40余代。SMT细胞主要由成纤维样细胞构成,生长分裂旺盛,至今也已传40余代。探究温度对其生长的影响,结果表明,两个细胞系在18~30℃均能正常生长,在30℃时细胞生长速度最快。核型分析显示,两个细胞系均出现了染色体非整倍性,说明两个细胞系的染色体已出现丢失、断裂或畸变,但其仍保持特征性染色体数44条。通过脂质体转染法成功的将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因转入两个细胞系中均成功地获得了表达,转染率约为30%。通过提取两个细胞系基因组DNA,克隆线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因片段,与NCBI上已公布的大菱鲆COⅠ基因序列相比对,二者与大菱鲆的同源性在99%以上,证明这两个细胞系来源于大菱鲆。牙鲆(日本牙鲆)又名褐牙鲆(Paralichthys olivaceus),隶属鲽形目(Pleuronectiformes),鲆科(Paralichthyidae),牙鲆属(Paralichthys),多分布于北太平洋西部,中国北方、韩国等海域被广泛养殖。在牙鲆养殖业快速发展的同时,也面临着病害发生频繁、种质退化、抗病优良品种缺乏等突出问题。建立牙鲆相关组织细胞系也可为遗传育种提供良好的材料。本文用胰酶消化法和组织块培养法启动原代培养对牙鲆脾脏、肝脏、肾脏等组织的离体培养做了初步研究,摸索了为牙鲆部分组织离体培养的合适的培养基条件。综上所述,本研究通过组织块培养法成功建立了大菱鲆大菱鲆脑细胞系(S.maximus brain cell line,SMB)和精巢细胞系(S.maximus testis cell line,SMT),并对其生长特性和外源基因转染性做了研究,为今后两个细胞系的进一步应用研究奠定了基础。同时本研究还对牙鲆部分组织细胞的离体培养做了探索,为其细胞系的建立提供参考。