论文部分内容阅读
本实验利用胡萝卜作为生物反应器受体生产轮状病毒外壳蛋白VP6,VP7。通过PCR,RT-PCR,Western Blot,ELISA检测整合有轮状病毒外源基因的胡萝卜植株,即从基因水平到蛋白水平逐步检测。并将蛋白水平上表达有轮状病毒外壳基因的胡萝卜植株免疫小鼠,免疫方法采用注射免疫和灌胃免疫。1提取胡萝卜DNA进行PCR分析,表明VP6,VP7,VP7-U基因都已整合到胡萝卜植株基因组中。2转基因植株的RT-PCR分析显示部分植株进行了反转录。3对转录水平上有表达的转基因植株进行Western Blot和ELISA分析,结果表明转基因胡萝卜植株可以有效地表达VP7蛋白,并具有一定的免疫原性。4利用转VP7基因胡萝卜根部蛋白注射免疫小鼠,抗原免疫量为1μg左右,免疫周期为两周,免疫三次后采血并提取小鼠血清进行ELISA分析,结果表明注射阳性胡萝卜植株蛋白的小鼠体内IgG含量要高于注射阴性胡萝卜植株蛋白的小鼠及未免疫的小鼠。利用转VP7-U基因胡萝卜根部蛋白灌胃免疫小鼠,抗原量为20-30μg,免疫周期为一周,免疫四次后采血提取血清并进行ELISA检测,结果表明灌服VP7-U基因的胡萝卜植株蛋白的小鼠IgG含量要高于灌服阴性植株的小鼠或未灌服小鼠的IgG的含量。5同时将转VP7-U基因的植株抗原量与VP7基因植株抗原量进行比较,ELISA分析表明,转VP7-U基因的植株抗原量要高于VP7基因植株抗原量。