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[目的]主要由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的炭疽病和由灰葡萄孢菌(Boteytis cinerea)引起的灰霉病是草莓生产上两大主要病害。化学防治是草莓生产上防治炭疽病、灰霉病两大病害的主要手段,病原菌群体对药剂的敏感性是决定防治效果的主要因素之一。传统的抗药性检测方法是将病原菌分离纯化后,转接在含药培养皿上,根据药剂对病原菌的生长抑制作用来鉴定是否为抗药性菌株,该方法工作量大,耗时长;本研究为了实现抗药性快速检测的目的,建立环介导等温扩增检测(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),在1~2 h内得到可靠的抗药性检测结果,能快速检测和监测病原菌的抗药性发展,从而合理指导用药。[方法]针对灰霉病,本研究通过错配碱基引物特异性鉴定抗药性菌株、优化反应组分和条件,从而建立抗药性LAMP快速检测体系。最后应用LAMP检测技术检测田间样品,同时将样品带回实验室分离培养,利用传统区分剂量法检测抗药性,结果和LAMP检测相比较,验证LAMP检测结果。针对炭疽病,本研究建立LAMP快速检测技术用于草莓苗期炭疽病的检测;随后,测定了草莓炭疽病菌的抗药性,分析其抗性分子机制,建立了草莓炭疽病菌抗药性LAMP检测方法。[结果]1.开发了一种环介导的等温扩增(LAMP)检测体系,设计错配引物,能快速检测灰葡萄孢菌β-tubulin基因上E198A突变基因型(对苯并咪唑类杀菌剂高抗);灰霉病菌E198A基因型LAMP检测的最佳反应条件为64℃,60 min;本研究中LAMP灵敏度是常规PCR的10倍。和区分剂量法的检测结果比较表明LAMP检测田间抗性菌株可达到100%的准确性。2.建立了LAMP快速检测体系,用于田间灰葡萄孢菌对甲氧基丙稀酸酯(QoIs)类杀菌剂的抗性监测和抗性发展风险评估,其中包含两个LAMP检测,其一能准确检测到灰霉病菌对Qo I类杀菌剂具有高度抗性的G143A突变体;其二能检测出灰葡萄孢中cytb基因上BCbi143/144内含子。LAMP检测的最佳反应条件为61℃,50 min,使用ALL-DNA-Fast-Out在10 min内对田间样品进行核提取前处理,以实现一步法快速检测。总之,本研究建立了一个快速灵敏的LAMP测定系统,用于灰霉病菌对QoIs杀菌剂抗性风险评估和监测田间抗药性。3.开发了一种直接用于草莓苗期炭疽病检测的LAMP体系,利用LFD(横向侧流试纸)及碱性聚乙二醇浸提等方法,快速进行田间样品前处理,实现田间病害快速检测。4.分别建立了LAMP快速检测方法,用于特异性检测胶孢炭疽菌对QoIs类杀菌剂高抗G143A突变基因型和对苯并咪唑类高抗E198A的突变体,检测结果和区分剂量法一致。[结论]本文研究结果初步实现了田间快速检测草莓主要抗药性病害的目的,对草莓生产上调整用药策略,提高药剂防治效果、减少药剂的使用量具有较大的现实意义。