功能红曲的发酵生产、品质评价及功能活性成分表征

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功能红曲中的洛伐他汀在降血脂等方面有着重要作用,但目前商业化生产功能红曲的主要方式为固态发酵,普遍存在发酵条件难控制、产品质量参差不齐等问题。本论文优化了功能红曲米粉中洛伐他汀的提取工艺,以及对比评价了市售功能红曲米粉的理化性质,并进一步建立了红曲霉液态发酵生产洛伐他汀的工艺条件,以期为基于液态发酵的洛伐他汀工业化生产提供理论和实验基础。本文首先通过探究溶剂种类、乙醇浓度、液固比、提取温度、提取时间对洛伐他汀提取率的影响,确定了最佳的零水平和波动区,再通过响应面设计和验证实验,得到市售功能红曲米粉中洛伐他汀的最佳提取条件,即以55%乙醇溶液为溶剂,在液固比40 m L/g、温度60℃下以超声功率300 W提取40 min,洛伐他汀提取率和酸型洛伐他汀提取率可分别达到90.24±0.59%和95.62±0.52%。以籼米为基质,通过固态浅盘培养红曲霉GN01得到洛伐他汀含量为3.07mg/g的功能红曲米粉F1。通过对F1和13种市售功能红曲米粉的评价对比,发现水分含量均低于10%,但3种市售功能红曲米粉的橘霉素含量超标。在同一厂家生产的功能红曲米粉中,随着洛伐他汀含量的提高,总糖含量大致呈下降趋势,而粗蛋白含量和麦角甾醇含量大致呈上升趋势。F1的总糖、还原糖和洛伐他汀含量相比于市售功能红曲米粉相对较低;但粗蛋白含量、糖化力、γ-氨基丁酸含量、麦角甾醇含量以及酸型洛伐他汀占比明显更高。以红曲霉GN01为生产菌株,通过筛选种子培养基和添加表面活性剂,得到有效缓解菌丝结团的种子培养基(g/L):葡萄糖30、蛋白胨17.5、甘油70、KH2PO4 2、Na NO3 2、Mg SO4·7H2O 1、司班80 0.5;以种子培养基为基础进行优化,得到最佳的发酵培养基(g/L):甘油80、蛋白胨26.37、KH2PO4 2、Mg SO4·7H2O 1、司班80 0.5;再通过对温度条件的优化得到最佳培养条件为30℃培养1 d后转为25℃继续培养,培养周期为18 d,此时洛伐他汀产量最高可达923.49 mg/L,其中酸型洛伐他汀占比为85.16%,该结果优于大多数报道结果。通过探究搅拌桨转速、搅拌桨组合以及溶氧条件的影响,得到液态5 L发酵罐培养红曲霉GN01产洛伐他汀的最佳工艺,即采用六直叶+六折叶+六直叶的三层桨叶结构,设置溶氧与转速关联并固定溶氧为40%,转速上下限分别为450r/min和50 r/min,通气量为1 vvm,于30℃培养1 d后变温至25℃继续培养,第14 d的生物量和洛伐他汀产量可分别达17.9 g/L和462.94 mg/L。此时菌丝体中洛伐他汀含量与固态浅盘发酵较为一致,但麦角甾醇含量提高了43.63%。
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