【摘 要】
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乙型肝炎病毒(HBV)是引起人类病毒性肝炎扩要病原体,长期接触病毒会导致肝脏持续性地损伤,肝硬化和原发性肝细胞癌.HBV的多聚(A)国尾信号除了能够正确地加工病毒mRNA的3末端
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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乙型肝炎病毒(HBV)是引起人类病毒性肝炎扩要病原体,长期接触病毒会导致肝脏持续性地损伤,肝硬化和原发性肝细胞癌.HBV的多聚(A)国尾信号除了能够正确地加工病毒mRNA的3末端外,对HBV的复制也是需要的.HBVC基因区的3端在HBV各亚型中是高度保守的,它编码的多肽链富含精氨酸,同时与前基因组RNA的馐和病毒DNA的复制有关.因此,HBV的加尾信号部位和HBV中C基因的3端保守地区是核酶介导的抗病毒研究的理想靶位点.我们针对上述位点设计了两个核心酶——针对加尾信号的RzA和针对C基因3端的RzC,研究了它们的抗病毒性.为了避免长的转录附加序列对核酶活性的影响,将核酶基因克隆于自剪切质粒PRG523中,体外切割实验表明两个核酶都能有效地切割靶RNA底物.而对应的点突变核酶dRzA和dRzC,由于在核酶催化核心引入突变,在体外对靶RNA底物没有切割活性.我们构建了在CMV启动子控制下的核酶真核表达质粒pCRzA/pCdRzA和PCRzC/pCdRzC.结果指出,锤头状核酶RzA和RzC能介导细胞内抑制HBV的复制和表达,以及RzC通过抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制显示抗病毒感染的能力.表明锤钎头状核酶可能作业HBV基因治疗的一种手段.
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