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禽白血病(Avian Leukosis,简称AL)是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,简称ALV)感染引起的禽类各组织和脏器肿瘤。ALV现已分至A～K 11个亚群,A、B、C、D、E、J和K亚群分离自鸡。A～D和J、K亚群为外源性病毒,而E亚群是内源性禽白血病病毒,在许多品系鸡体内极普遍存在,低致病性或无致病性。为了建立禽白血病检测和净化规范,本研究开展了禽白血病群标准抗原、J和A亚群禽白血病标准抗原候选物和禽白血病群特异性标准单抗、J亚群禽白血病特异性标准单抗、J和A亚群禽白血病特异性标准血清候选物的研究,并以此作为生物学材料,对市场上相关试剂盒进行了检验,获得良好效果,为进一步净化禽白血病奠定了基础。一、禽白血病群标准抗原、J和A亚群禽白血病标准抗原候选物的研制p27基因是禽白血病病毒A、B、C、D、J亚群和K亚群共同的高度保守的基因。本研究用表达禽白血病群特异性抗原GST-p27蛋白的pGEX-6p-1-p27重组菌进行诱导表达,对表达产物GST-p27进行了纯化,制备了ALV的重组GST-p27融合蛋白；同时扩增了J亚群禽白血病病毒JS09GY07株、A亚群禽白血病病毒AH10株；对这些候选物质进行了ELISA、PCR及IFA鉴定,同时通过一系列纯粹性、蛋白浓度、TCID50等标定,然后经过分装、物理性状检测及装量差异系数分析、细菌及支原体感染情况鉴定、均一性、稳定性以及保存时间的标定,分别制备出了禽白血病群标准抗原、J和A亚群禽白血病标准抗原候选物及其对应的弱阳性及阴性抗原,利用这些标准物质对市场上用于检测禽白血病群特异性抗原p27的试剂盒进行检验,发现市场上的试剂盒良莠不齐,提示在进行禽白血病检测及净化工作中选择市场上相应的试剂盒时应予以足够重视。二、禽白血病群特异性标准单抗、J亚群禽白血病特异性标准单抗、J和A亚群禽白血病特异性标准血清候选物的研制本研究分别复苏并扩增了针对禽白血病群特异性抗原p27蛋白的特异性单克隆抗体ALVp27-5D3杂交瘤细胞株及针对J亚群禽白血病特异性抗原gp85蛋白的单克隆抗体细胞株JE9,并分别将状态好的ALVp27-5D3杂交瘤细胞和JE9杂交瘤细胞腹腔注射6～8周龄的Balb/c雌性小鼠,大量制备ALVp27-5D3及JE9单克隆抗体腹水,并进行了纯化,制备了禽白血病群特异性标准单抗、J亚群禽白血病特异性标准单抗候选物。用ALV-J通过肌肉注射途径对SPF鸡进行攻毒,五免十二天采血分离血清,作为J亚群禽白血病特异性标准血清候选物。用ALV-A通过腹腔注射、滴鼻点眼途径对SPF鸡进行攻毒,二免十二天采血分离血清,作为A亚群禽白血病特异性标准血清候选物。应用IFA、ELISA、Western blot等对制备好的禽白血病群特异性标准单抗、J亚群禽白血病特异性标准单抗、J和A亚群禽白血病特异性标准血清候选物进行标定,然后进行分装、物理性状检测及装量差异系数分析,细菌及支原体感染、均一性、稳定性以及保存时间等一系列标定,最终获得了抗ALV-J和ALV-A的标准多抗血清和特异性标准单克隆抗体。分别将群特异性标准单抗候选物、J和A亚群禽白血病特异性标准血清的阳性、弱阳性及阴性抗体,对市场上检测禽白血病群特异性抗体、J和A亚群禽白血病特异性血清的试剂盒进行检验,发现市场上的试剂盒良莠不齐,在禽白血病检测及净化工作应予以高度重视。