第一部分：小鼠嗅鞘细胞的分离培养和形态学的初步研究目的：研究小鼠嗅鞘细胞(OECs)体外培养的不同方法,为获取数量多,活性好,形态优的嗅鞘细胞提供一定的实验基础。方法：4只出生2～3个月的BALB/c小鼠,经枕骨大孔取嗅球,剥离嗅球外周两层制成细胞悬液。采取未纯化培养对照组、一次差速贴壁结合阿糖胞苷(Ara-c)纯化与多聚左旋赖氨酸包被培养板培养组(纯化包被组)和一次差速贴壁结合Ara-c纯化与未用多聚左旋赖氨酸包被培养板培养组(纯化未包被组)分别培养小鼠OECs,观察其原代和传代培养的细胞生长状况及形态,并进行免疫细胞化学鉴定。结果：纯化未包被组OECs早中期无论数量还是形态都优于纯化包被组,而未纯化对照组的OECs早中期数量明显优于纯化组。结论：一次差速贴壁结合Ara-c纯化未包被进行小鼠OECs培养是一种简捷有效地方法。第二部分：大鼠嗅鞘细胞的分离培养和形态学的初步研究目的：研究大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)体外培养的不同方法,为获取数量多、活性好、形态优的嗅鞘细胞提供一定的实验基础资料。方法：2只出生2～3个月的SD (Sprague Dawley)大鼠,经枕骨大孔取嗅球,剥离嗅球外周两层制成细胞悬液。采取一次差速贴壁结合阿糖胞苷(Ara-c)纯化与多聚左旋赖氨酸包被培养板培养(纯化包被组)和一次差速贴壁结合Ara-c纯化与未用多聚左旋赖氨酸包被培养板培养(纯化未包被组)分别培养大鼠OECs,观察其原代和传代培养的细胞生长状况及形态,并进行免疫细胞化学鉴定。结果：纯化包被组大鼠OECs无论数量还是形态都优于纯化未包被组。结论：大鼠OECs培养时培养板必须进行包被处理。图7表1参考文献17第三部分：小鼠星形胶质细胞的分离培养和鉴定目的：探索新生小鼠星形胶质细胞(astrocyte, AST)的分离、培养和鉴定以利于嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)的培养。方法：取1只新生的BALB/c小鼠,分离脊髓并制成细胞悬液、参照OECs的培养方法培养新生小鼠脊髓星形胶质细胞,用GFAP(胶质纤维酸性蛋白)、N200(神经微丝蛋白)、S100(硫100)免疫细胞化学染色方法分别鉴定。结果：S100免疫细胞化学染色的星形胶质细胞无论数量和形态都明显优于GFAP免疫细胞化学染色。结论：S100免疫细胞化学染色是鉴定星形胶质细胞最好的方法,星形胶质细胞培养可用OECs的培养方法,但须去除胰蛋白酶消化步骤。图7表0参考文献8第四部分：小鼠嗅鞘细胞与脊髓组织细胞共培养的研究目的：研究小鼠嗅鞘细胞(OECs)在体外与脊髓组织细胞共培养时对脊髓组织细胞生长状况的影响。方法：取新生BALB/c小鼠嗅球和脊髓分别进行培养,共分三组：一组小鼠OECs培养、一组脊髓组织细胞培养、一组OECs与脊髓组织细胞共培养。通过倒置相差显微镜观察各组生长情况,并通过免疫细胞化学染色观察和鉴定、计算细胞数、测定细胞活性。结果：OECs与脊髓组织细胞共培养组细胞密度明显高于两对照组,共培养组NF200和GAP43染色明显多于脊髓组织细胞培养组,OECs培养组不染色。OECs且对星形胶质细胞生长具有抑制作用。结论：嗅鞘细胞对脊髓组织神经元细胞生长具有明显的促进作用。图7表0参考文献7