Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)是新近发现的模式识别受体,该家族通过识别病原体相关分子模式pathogen associated molecular patterns, PAMP)激活免疫细胞,在天然免疫防御病原体中起着重要作用。髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88, MyD88)作为一种细胞内信号接头蛋白,在TLR家族和白介素1受体(interleukin1receptor, IL-1R)家族信号通路中发挥关键作用。MyD88蛋白具有3个功能结构域：N端的死亡结构域(death domain, DD)、中间区域(intermediate domain, ID)及C端的Toll样受体和白介素1受体相关结构域(TLR/IL-1R related domain, TIR),其中MyD88蛋白的TIR结构域能与TLRs和IL-1Rs的TIR结构域相结合,从而介导信号向下游传导。MyD88是重要的信号转接蛋白,其介导的信号通路与肠炎、动脉粥样硬化、心肌肥大、癌症等在内的多种疾病的发生和发展过程有着密切的联系。MyD88的结构和功能研究将为这些疾病的治疗提供新的方向和思路。本研究以水牛外周血白细胞为材料,提取总RNA,通过RT-PCR的方法扩增MyD88基因全长编码序列,将其连接至pEGFP-Cl质粒,构建(?)EGFP-Cl-MyD88真核重组表达载体,重组载体经菌落PCR、酶切和测序鉴定后,在脂质体的介导下转染进HEK293细胞中,使其发生瞬时表达,并通过G418抗性筛选,构建稳定表达EGFP-MyD88融合蛋白的HEK293细胞系。结果表明：转染48h后,绿色荧光蛋白在转染重组质粒的细胞中呈颗粒状散在分布,而在转染空质粒的细胞中均匀分布；Western Blot结果显示在62kDa处出现一条特异性抗体结合条带；经过G418的持续筛选,获得了稳定表达目的蛋白的阳性克隆,FCM分析结果显示,转染pEGFP-Cl空质粒的细胞系阳性率达93.35%,转染重组质粒的细胞系阳性率达84.33%,表明成功构建了稳定表达MyD88的HEK293细胞系。以上结果为针对MyD88分子的疾病治疗及其功能研究奠定了基础。