塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗的增敏作用及分子机制研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:shgandang
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目的:通过体外实验观察非甾体抗炎药塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗的增敏作用,并探讨可能的分子机制。方法:1、MTT法检测不同浓度塞来昔布对SKOV3细胞的生长抑制作用,并筛选出无毒剂量浓度,作为后续实验浓度。2、MTT法检测顺铂联合无毒剂量塞来昔布对SKOV3的细胞毒性。3、流式细胞术(FCM)检测顺铂联合无毒剂量塞来昔布对SKOV3细胞凋亡率的影响。4、Real-Time PCR、Western Blot检测顺铂与无毒剂量塞来昔布联合用药后SKOV3细胞中Survivin mRNA及蛋白的表达变化。5、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测顺铂与无毒剂量塞来昔布联合用药后SKOV3细胞培养基中前列腺素E2的含量。结果:1、MTT结果显示:COX-2特异性抑制剂塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞具有生长抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。当塞来昔布浓度≤10uM/L时,对SKOV3细胞生长无显著抑制作用(抑制率<10%),因此筛选10uM作为后续实验浓度。2、MTT结果显示:10uM塞来昔布与顺铂联合应用显著抑制SKOV3细胞的生长,生长抑制率明显高于单用塞来昔布组和顺铂组,差异有统计学意义(P=0.000),且呈时间依赖性(F=204.287,P=0.000),根据金正钧法计算两药联合作用24、48和72h后的合并效应q值,分别为1.27、1.37、1.38,均>1.15,表现为增敏作用。3、流式细胞术结果:10uM塞来昔布与顺铂联合作用SKOV348h后细胞凋亡率达46.98%,高于单用DDP组的27.99%。4、Real-Time PCR及Weatern Blot检测结果表明:l0uM塞来昔布与顺铂联合作用SKOV348h后,细胞中Survivin mRNA及蛋白相对表达量均明显低于单用顺铂组,差异有统计学意义(P=0.000)。5、ELISA法检测结果显示:10uM塞来昔布与顺铂联合作用SKOV3细胞48h后,培养基中人PGE2含量与单用塞来昔布组比较没有明显差异(P>0.05)。结论:1、非甾体抗炎药塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞具有生长抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;2、塞来昔布可增加卵巢癌SKOV3细胞对顺铂化疗的敏感性,呈时间依赖性;3、塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗的增敏作用可能与下调了Survivin基因及蛋白表达水平,促进细胞凋亡有关;4、塞来昔布在SKOV3细胞顺铂化疗增敏作用中可能仅起到了调节作用,并没有发挥治疗作用,是COX-2非依赖的。
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