龙眼皮渣中原花青素的提取及其活性研究

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原花青素,也称缩合单宁,是一类由黄烷醇聚合而成的多酚类物质,具有多种生物活性。作为我国重要水果龙眼的废弃物,龙眼皮渣是活性原花青素的潜在来源。为了减轻环境污染,提高龙眼的附加值,本文先研究了龙眼皮渣提取物多个萃取组分的体外抗氧化活性;然后优化了龙眼皮渣原花青素的提取工艺;对原花青素进行纯化,并进行结构鉴定;最后,测定了原花青素的体外抗氧化活性及a-淀粉酶抑制活性。结果如下:1、体外抗氧化活性实验表明,龙眼皮渣乙酸乙酯萃取组分(LPEF)显示出了最强的DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)自由基、ABTS[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt]自由基清除能力及还原力,IC50值依次为0.506 mg/mL,0.228 mg/mL、0.253 mg/mL; LPEF总酚含量最高,以没食子酸当量(GAE)表示,达230.816 mg GAE/g,其后依次为乙醚组分(LPDF)、正丁醇组分(LPBF)、甲醇粗提物(LPCE)及剩余组分(LPR)。2、基于单因素实验结果,利用响应曲面法研究了提取时间(X1)、液料比(X2)、乙醇浓度(X3)及提取温度(X4)对原花青素得率的影响,对龙眼皮渣原花青素的提取工艺进行优化,确定了最优工艺条件为:提取时间25 min,液料比17:1(mL/g),乙醇浓度51%,提取温度50℃,对应的最优得率为1.21%;方差分析表明回归方程拟合性好,各因素的影响程度依次为:X2>X3>X4>X1。3、利用Sephadex LH-20对原花青素进行纯化,并通过紫外-可见扫描(UV-vis)、红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)、质谱(MS)等手段进行结构鉴定:1HNMR图谱表明龙眼皮渣原花青素的平均聚合度为3.3;13CNMR图谱表明其中主要为原矢车菊素(PC),并含少量原飞燕草素(PD); MS结果表明其主要为以儿茶素、表儿茶素为结构单元的低聚原花青素,聚合度从2到8,包含A型和B型连接。4、体外抗氧化活性实验表明,纯化后的龙眼皮渣原花青素比溶剂萃取组分LPEF、LPDF等具有更强的DPPH、ABTS自由基清除能力及还原力:对应的IC50值分别为0.083 mg/mL,0.054 mg/mL和0.061 mg/mL,与Vc相当。5、龙眼皮渣原花青素对猪胰腺α-淀粉酶具有较强的抑制效果,其对α-淀粉酶的IC50值为0.075 mg/mL;动力学分析表明原花青素对α-淀粉酶的抑制类型为可逆的反竞争性抑制。
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