变形链球菌Ⅰ型葡糖基转移酶(GTF-I)重组表达、纯化、活性鉴定及抗GTF-I杂交瘤细胞株的初步建立

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变形链球菌(S.mutans)是引起龋齿的主要致病菌,其I型葡萄基转移酶(GTF-I)是致龋变链菌重要的毒力因子之一。GTF-I合成不溶性葡聚糖,在变形链球菌的粘附和产酸中发挥重要作用。研究表明,针对GTF的特异性抗体能有效抑制龋齿的发生,GTF-I可作为免疫抗原用于防治龋齿。因此,本研究拟获得重组GTF-I,并以其作为抗原筛选GTF-I单克隆抗体。 本研究通过PCR扩增得到MT8148变形链球菌的gtfB基因,以pRSET-A为载体,将构建好的pRSETA-gtfB转入大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并采用硫酸铵沉淀、镍离子亲和柱、30Q阴离子交换层析等方法纯化rGTF-I。经过基因克隆、表达及纯化等,成功获得了纯度达到99%,酶活为55.33u/mg的rGTF-I重组蛋白。采用此rGTF-I免疫小鼠,取其脾脏中的淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,获得了3株可分泌抗rGTF-I单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株。 本研究为龋齿的防治及疫苗的研究奠定了基础。
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