脑缺血是当今社会主要疾病之一，缺血诱导的某些关键酶活性的改变参与了缺血性脑损伤的形成。因此阐明其发生，发展，转归的病理生理学分子机制越来越受到重视。本文采用S-D大鼠的四动脉结扎全脑缺血模型，并利用亚硒酸钠，一种抗氧化剂和K252a，一种MLK的特异性抑制剂，来分别阐明脑缺血复灌早期与氧化应激的关系和JNK介导的脑缺血性神经元凋亡的下游信号通路。 1.在大鼠海马全脑缺血／复灌早期亚硒酸钠通过激活P13K／AKT通路抑制ASK1／JNK级联反应 神经元的凋亡或存活取决于细胞内凋亡信号通路和抗凋亡信号通路之间的平衡。在这种平衡中凋亡信号通路ASK1／JNK信号级联反应和抗凋亡PI3K／AKT信号通路起了重要的作用。大量的文献报道，ASK1／JNK信号级联反应和P13K／AKT信号通路之间存在着密切的联系。ASK1-Ser83是AKT的磷酸化位点，而ASK1-Thr845的磷酸化与ASK1激酶的活性有关。ASK1-Ser83磷酸化的增强可以使ASK1-Thr845的磷酸化降低，从而引起ASK1激酶活性的减弱。我们实验室早期的实验结果表明在全脑缺血复灌早期ASK1／JNK信号级联反应与氧化应激有关。在本实验中，我们在缺血前连续7天尾静脉注射亚硒酸钠，一种抗氧化剂，来检测在全脑缺血复灌早期ASK1／JNK信号级联反应和PI3K／AKT信号通路与氧化应激的关系。结果表明，在全脑缺血复灌30 min，亚硒酸钠可以明显增强AKT和ASK1-Ser83的磷酸化，而ASK卜Thr845、MKK4、JNKl／2的磷酸化被明显抑制。同时，我们联合使用LY294002，一种PI3K的特异性抑制剂，发现LY294002和亚硒酸钠联合用药可以逆转上述现象的发生，说明亚硒酸钠的作用是PI3K所依赖的。结果表明，在脑缺血复灌早期，抗氧化剂亚硒酸钠可以通过P13K／AKT信号通路的激活抑制ASK1／JNK信号级联反应从而起到保护神经元的作用。 2.K252a在大鼠海马全脑缺血／再灌介导的神经元损伤中对JNK下游信号通路的影响 采用S-D大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，于缺血前20 min脑室注射K252a，用免疫沉淀、免疫印迹以及免疫组化的方法研究蛋白间的相互作用及蛋白激酶的活性变化。结果发现，在海马的CAl 区，K252a可以明显抑制脑缺血介导的JNK核底物c-jun的磷酸化和Fasl蛋白的表达，以及Fasl和Fas结合的增高，并进一步抑制凋亡信号调节激酶-1(ASK1)的磷酸化；另一方面，通过抑制JNK非核底物Bcl-2和14-3-3的磷酸化，阻止了Bax从Bcl-2／Bax或14-3-3／Bax二聚体上的解离，从而最终抑制了脑缺血介导的Bax的线粒体转位和cyto-c的胞浆释放。总之，以上结果表明，激活的JNK通过磷酸化其核底物c-jun增加了AP-1的转录活性，并促进凋亡蛋白Fasl的表达，Fasl结合其受体从而启动Fas介导的凋亡信号通路，并进一步激活ASKl的磷酸化；另一方面，激活的JNK通过磷酸化其非核底物Bcl-2和14-3-3，促进Bax从Bcl-2／Bax或14-3-3／Bax二聚体上释放到线粒体，并介导cyto-c从线粒体释放到胞浆，从而启动线粒体介导的凋亡信号通路。缺血前20min脑室注射K252a可以明显抑制JNK介导的死亡受体凋亡信号通路和线粒体凋亡信号通路。