甾醇酯酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

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甾醇酯酶也称为胆固醇酯酶(EC3.1.1.13),它催化水解甾醇酯生成甾醇与脂肪酸,此前,甾醇酯酶主要与胆固醇氧化酶联合,应用于检测血液中总胆固醇的含量。近年来,甾醇酯酶的应用领域正在逐渐拓宽,有研究报道,Ophiostoma piceae和Melanocarpusalbomyces的甾醇酯酶具有解决机械制浆造纸工艺中树脂障碍问题的潜力。目前,甾醇酯酶的来源有限,活性较低,离实际工业化应用还有一定的距离,所以需要对更多来源的甾醇酯酶进行研究。设计了一种以植物甾醇酯为底物,罗丹明B为荧光指示剂的平板筛选方法,从土壤中筛选得到24株具有甾醇酯酶活性的菌株,其中编号为jx-39的菌株具有最高产酶活性,经16S rDNA鉴定表明菌株jx-39属于金黄杆菌属,命名为Chryseobacterium sp.jx-39。研究了菌株Chryseobacterium sp.jx-39的摇瓶发酵产酶条件,得到初步优化的产酶培养基为(g/L):菜籽油2,牛肉膏5,K2HPO42,MgSO47H2O0.5,(NH42SO41,葡萄糖10,pH7.0;优化的产酶培养条件为:装液量10%,接种量2%,培养温度30℃,摇床转速200rpm。在优化的产酶条件下,菌株jx-39培养18h产酶活性最高可达到0.194IU/mL。初步纯化了Chryseobacterium sp.jx-39的甾醇酯酶并研究其部分酶学性质,该酶的酶促反应最适温度为40℃,最适pH为7.5,其在45℃以下,pH5.0-9.0具有较好的稳定性。该酶对不同碳链长度的脂肪酸胆固醇酯和对硝基苯酚酯具有广泛的底物特异性,显示该甾醇酯酶具有解决机械制浆造纸工艺中树脂障碍问题的潜力。
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