原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种自身免疫性肝脏疾病,它的典型特征是肝脏有大量淋巴细胞浸润在胆管周围,并且血清中有高滴度的由自身反应性B细胞分泌的抗线粒体抗体AMAs。有很多因素参与到PBC的发病过程中,包括免疫失调、遗传的易感性以及环境因素等。已有的研究指出B细胞在PBC的发病过程中的作用十分复杂,根据情况不同,可能发挥致病性作用或者免疫调节性功能。但是其具体机制尚不清楚,仍然需要进一步研究和探索。B细胞是一类重要的免疫细胞,主要分为2个亚群,即B1细胞(包含B1a细胞和Blb细胞)和B2细胞。这两个B细胞亚群在前体细胞来源、发育途径、组织分布、表型及功能等方面存在差异。在自身免疫性疾病发生过程中,一般认为B细胞通过分泌抗体发挥致病性作用。但最近的研究发现B细胞除了包含发挥致病性功能的亚群,同时还具有免疫调节性功能的亚群。调节性B细胞(Breg细胞)发挥功能的机制主要包括产生IL-10和TGF-β、参与次级抗原递呈、与致病性T细胞相互作用以及诱导调节性T细胞(Treg细胞)的产生等。B1细胞是一个特殊的B细胞亚群,大量存在于腹腔及胸腔中,主要通过分泌天然抗体、作为抗原递呈细胞以及分泌细胞因子来发挥免疫保护作用。B1细胞来源的天然抗体在细菌和病毒感染过程中发挥重要的保护作用。Bla细胞是腹腔B1细胞中的主要亚群,Bla细胞经典的功能包括产生血清中静息状态的IgM、分泌肠道IgA以及发挥免疫调节功能等。B1a细胞是抗炎性细胞因子IL-10的主要来源,并且在接触性超敏反应模型以及病理条件下能够发挥免疫调节性功能。为了更好的阐明B细胞亚群在PBC发病进程中的作用,我们以p40-/-IL-2Rα-/-小鼠以及被广泛研究的dnTGF-βRII小鼠作为PBC的模型鼠展开研究。本论文主要探究了p40-/-IL-2Rα-/-小鼠中腹腔B1a细胞的紊乱与自身免疫性胆管炎的关系,同时利用dnTGF-βRⅡ小鼠腹腔B细胞的共转输实验对模型鼠中腹腔B细胞的免疫调节性功能进行验证。目前取得的结果如下：1.p40-/-IL-2R α-/-模型鼠腹腔徽环境改变影响腹腔B细胞数目并与肝脏炎症具有相关性为了探究p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠肝脏损伤时腹腔微环境的变化,通过检测腹腔中各细胞亚群数量,我们发现模型鼠中腹腔总细胞数目显著增多,且增多的主要是T细胞,尤其是致病性的CD8+T细胞,而B细胞数目显著减少。进一步研究表明模型鼠腹腔CD4+和CD8+T细胞分泌Thl型炎性细胞因子IFN-γ的能力显著增强。通过检测腹腔灌洗液中炎性细胞因子的水平,我们发现促炎性细胞因子TNF和MCP-1水平显著升高,这可能是导致腹腔各细胞亚群改变的原因。通过相关性分析,发现模型鼠中腹腔总细胞数与肝脏单个核细胞数呈正相关,腹腔中B1a细胞占B细胞的比例与腹腔及肝脏单个核细胞数呈负相关,且腹腔中Bla细胞占B细胞的比例与腹腔及肝脏中致病性的CD8T细胞的比例呈负相关。2. p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠腹腔Bla细胞数目减少且功能性分子改变通过对PBC模型鼠发病过程中腹腔B细胞的详细检测,我们发现相比于对照鼠,模型鼠腹腔B1a及B1b细胞的比例和数目显著降低,而且模型鼠腹腔Bla细胞的比例随着年龄增长逐渐降低。进一步的机制研究表明模型鼠腹腔Bla细胞增殖能力显著降低且凋亡水平显著升高。模型鼠腹腔B1a细胞数目显著减少的同时,与Bla细胞免疫调节性功能相关分子,包括IL-10, CTLA-4和GITR的表达水平都显著下降；与B1a细胞活化及免疫共刺激相关分子CD44和CD80的表达水平明显降低。通过对另一种PBC模型鼠,即dnTGF-βRII小鼠的表型检测,我们发现与p40-/-IL-2Ra-/-模型鼠类似, dnTGF-βRII小鼠腹腔B1a细胞比例下降,且表达IL-10、CTLA-4、CD44和CD80的水平同样显著低于同窝对照鼠。3. p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠腹腔Bla细胞转录组学分析为了全面探究p40-/-IL-2Ra-/-模型鼠腹腔B1a细胞转录组变化及其内在机制,利用基因芯片技术并配合荧光定量PCR验证,我们发现与对照鼠相比,模型鼠腹腔Bla细胞有381个基因发生了显著变化(2倍以上差异),其中包含大量细胞因子及其受体相互作用相关、转录因子活化相关及细胞周期相关基因的变化。且多个与B细胞功能相关的基因都发生了显著改变,其中具有免疫抑制性基序(ITIM)的分子CD72 (Cd72)、CD22 (Cd22)等表达显著上升,与流式结果一致的Cd44、Ctla4等表达显著下降,以及IL-10的上游抑制分子AHR (Ahr)等表达显著上升。这些发现详细地展示了模型鼠与对照鼠腹腔Bla细胞存在的差异,揭示了B1a细胞异常在PBC发病过程中的重要作用机制,并提示了一些在人类PBC研究中值得参考的基因和信号通路。4.PBC模型鼠腹腔B细胞对自身免疫性胆管炎治疗潜力的评估为了探讨PBC模型鼠腹腔B细胞对胆管炎是否具有治疗潜能,我们进一步利用过继转输实验发现单转输dnTGF-βRⅡ模型鼠脾脏CD8+T细胞能引起RAGI-/-受体鼠肝脏产生严重的淋巴细胞浸润,而将dnTGF-βRⅡ模型鼠腹腔B细胞或WT鼠腹腔B细胞与dnTGF-βⅠ RⅡ模型鼠脾脏CD8+T细胞共转输,发现RAG1-/-受体鼠肝脏淋巴细胞浸润都有所减轻。该实验为证明PBC模型鼠腹腔B细胞在炎性条件下具有强大的免疫调节功能提供了有利的证据。综上所述,我们发现在炎性环境下,p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠中腹腔B1a细胞显著减少,且B1a细胞免疫调节性功能紊乱,分泌免疫调节性分子IL-10和表达CTLA-4的水平显著降低,导致腹腔B1a细胞对致病性T细胞的抑制能力下降。dnTGF-βRⅡ模型鼠腹腔Bla细胞的表型与p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠类似。因此,我们认为PBC模型鼠腹腔B1a细胞免疫调节性功能损伤导致模型鼠病情加重,这可能为PBC的治疗提供了一个新的方向。