2013年2月,H7N9病毒由禽类跨越到人类,3月底在上海首次发现感染H7N9亚型禽流感的病例,随之在北京,河南,安徽,江苏等地陆续出现H7N9患者。截止到2016年底,世界卫生组织(WHO)已报道了 800多例的感染者,感染患者常以发热、咳嗽等症状起病并迅速发展为急性肺炎,进而造成器官衰竭,死亡率在35%-40%。目前针对禽流感的一线药物,如神经氨酸酶抑制剂和离子通道抑制剂(M2蛋白阻滞剂),现已证明H7N9病毒对M2蛋白阻滞剂已产生耐药,并有10%的病毒对神经氨酸酶抑制剂有耐药。近年来,通过基因工程的手段研制的一些疫苗和抗体药物展现出了良好的应用前景,随着技术的完善,不断弥补传统手段的不足。H7N9病毒属于正黏病毒科,甲型流感病毒属,有包膜,基因组为8节段的单股负链RNA,共编码11种蛋白。根据在禽中致病性的高低可将禽流感分为低致病性禽流感(Low pathogenic AIV,LPAIV)和高致病性禽流感(Highly pathogenic AIV,HPAIV)。甲型流感病毒可分为若干个亚型,根据红细胞凝集素(HA)与神经氨酸酶(NA)抗原性的差异,HA有16种形态(H1～H16),NA则有9种形态(N1～N9)。血凝素(hemagglutinin,HA)又分为HA1亚基和HA2亚基两部分,二者通过二硫键连接。HA1在病毒识别膜表面的唾液酸聚糖受体的过程中起关键作用,HA2较HA1包含更多的保守结合位点,在病毒与胞膜融合后,病毒核酸进入宿主细胞的过程起主要作用。针对HA的中和抗体,可有效地阻断病毒在体内的感染机制,并诱导多重抗病毒反应,为禽流感病毒的预防和控制奠定良好的基础。本文以实验室建立的方法,对H7N9病毒HA2亚基进行基因工程改造,构建真核表达载体,并导入CHO细胞中,随后筛取稳定表达株,利用CHO真核表达系统高效表达HA2重组蛋白。将纯化得到的重组HA2重组蛋白与弗氏佐剂充分乳化,并免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂交瘤细胞经过酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测、多次有限稀释克隆,最终筛取能够稳定表达抗H7N9 HA2单克隆抗体的杂交瘤细胞株4株,分别命名为:4C6-1、4C6-3、4F1-2、4F1-3。该三株杂交瘤细胞连续传代10次和冻存再复苏均不影响其分泌抗体的稳定性。H7N9亚型禽流感病毒对MDCK细胞侵染后,以本实验制备的单克隆抗体作为一抗进行孵育,利用细胞免疫荧光进行检测,结果显示,本实验制备的单抗可与H7N9病毒实现有效的杂交。鸡胚保护实验表明,抗体对鸡胚的保护作用呈正相关,当抗体用量达400μg时可实现对鸡胚在5LD50的攻毒情况下100%的保护。针对H7N9HA2抗原单克隆抗体的制备,为H7N9病毒的快速鉴定与抗体药物的制备奠定基础。