目的:用分子克隆技术制备D5S818、D19S253、DYS447、DYS448等4个STR基因座等位基因阶梯,解决STR分型的准确性和标准化问题,建立制备STR基因座等位基因阶梯的新方法,并且应用自制的D19S253基因座等位基因阶梯,进行该基因座在所选样本中的群体遗传学调查,探讨等位基因阶梯的法医学应用价值。 方法:用一种改进的酚、氯仿、异戊醇方法提取DNA,采用PCR扩增,聚丙烯酰氨凝胶电泳,银染显带分析技术,分子克隆技术和DNA测序技术,对352例男性样本,135例女性样本,筛选出4个STR基因座的等位基因片段,将其插入PGEM-T质粒载体中,导入大肠杆菌,使其随大肠杆菌的无性繁殖而复制,获得每一个等位基因片段的大量拷贝,PCR扩增鉴定,测序分析,制备出4个STR基因座的等位基因阶梯。 结果:所建方法制备出了4个STR基因座的等位基因阶梯,保存重组质粒及转染大肠杆菌,建立等位基因阶梯的重组质粒库,可实现等位基因阶梯的大量快速制备和永久同一性。 结论: 1.用分子克隆技术制备等位基因阶梯为标准化评估新研发的基因座提供了规范命名的标准; 2.建立等位基因阶梯的重组质粒库,可实现等位基因阶梯的大量快速制备和永久同一性; 3.分子克隆技术制备的等位基因阶梯在法医学实践中有较高的应用价值。