论文部分内容阅读
背景:人表皮生长因子受体2（HER2）对于乳腺癌细胞的生长和增殖具有重要作用,HER2抑制剂的发现开启了靶向HER2阳性乳腺癌（HER2+BC）治疗的新时代。但是临床研究中,发现很多HER2+BC患者对于HER2抑制剂产生了耐药性。多种受体酪氨酸激酶（RTKs）的异常激活或表达水平上升作为主要的抗性机制被广泛研究。由于被HER2抑制剂激活的RTKs具有多样性,单一的RTK激酶抑制剂无法抑制多种激酶。因此,HER2+BC患者的治疗面临着重大的挑战,急需新的治疗方法。CDK7是依赖细胞周期蛋白的激酶家族一份子,THZ1是一种CDK7的共价抑制剂。在本课题中,我们将探讨转录激酶CDK7的抑制对耐药性HER2+BC的治疗作用,并对其作用机制进行初步的探讨,以其为耐药性HER2阳性乳腺癌的临床治疗提供可能的靶点。方法:本研究运用体外和体内实验以评估THZ1在HER2抑制剂耐药性乳腺癌细胞系（HER2iR）和HER2抑制剂敏感性乳腺癌细胞系（HER2iS）中的作用。检测联合使用THZ1和HER2抑制剂拉帕替尼（Lapatinib）的治疗是否能恢复HER2iR对于Lapatinib的敏感性。通过细胞活性测定、流式细胞分析法、免疫蛋白印迹、RNA测序、微阵列基因表达谱分析、实时荧光定量PCR、小鼠异种移植、免疫组织化学和数据统计分析方法,来确定CDK7介导的多激酶信号传导。结果:本研究发现无论HER2iR还是HER2iS细胞系均对THZ1表现出高度敏感性。CDK7是通过抑制转录,而不是直接通过常规CDK的磷酸化来促进细胞周期进程。在体外HER2iR乳腺癌细胞实验中,CDK7抑制剂THZ1与HER2抑制剂Lapatinib具有显著的协同作用。在体内实验HER2iR乳腺癌异种移植模型中,THZ1与Lapatinib的协同作用显著抑制肿瘤增殖和诱导细胞凋亡。CDK7的转录激酶活性不仅受HER2影响,还受HER2抑制后激活的RTKs、下游SHP2和PI3K/AKT途径的影响。结论:本研究揭示了CDK7在HER2+BC的转录激酶作用,并利用对转录激酶CDK7的抑制,作为阻断多种HER2iR相关激酶参与的基因激活的其他治疗途径。