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骆驼体内存在天然的重链抗体，克隆其可变区得到的最小功能性抗原结合片段，称为纳米抗体。纳米抗体具有亲和力高、稳定性强、易表达、组织穿透能力强等优点。作为一种新型抗体，纳米抗体在基础研究、疾病诊断和治疗领域具有广阔的应用前景。各类展示技术的引入使得纳米抗体的筛选制备变得更加便捷和高效。其中，噬菌体展示技术是最为常用的方法。此外，在纳米抗体制备过程中，文库的类型较为多样，文库的质量也直接影响纳米抗体制备的结果。 借助本课题组成熟的噬菌体展示纳米抗体技术平台，本论文系统地构建了免疫、天然和合成文库三种类型的抗体库筛选鉴定纳米抗体。(1)首先，通过周期性地骆驼免疫，本论文构建了ApoB-100倾向性的纳米抗体免疫文库;通过采取24只未经免疫抗原的骆驼的外周血和另一只未免疫骆驼的脾脏并提取总RNA进行VHH基因扩增，本课题构建出库容达6.86×1011，VHH基因多样性丰富的天然文库;(2)其次，以纳米抗体保守框架cAbBCII10为骨架并借助新颖的三联体密码子盒技术，利用搭桥PCR技术成功构建了CDR3氨基酸随机化，库容较大的合成文库。(3)接着，利用噬菌体表面展示技术，本研究成功从免疫文库筛选获得ApoB-100特异性纳米抗体;从天然文库获得PCT、NGAL、CD47和HER3特异性的纳米抗体，并对anti-PCT纳米抗体进行耐热性研究和检测功能性验证;从合成文库获得PA、NGAL、CD47和HER3特异性纳米抗体，并以anti-PA纳米抗体为代表，比较了其与免疫库来源的anti-PA纳米抗体的抗原反应活性和耐热性。更为重要的是，本论文成功建立起新型的基于纳米抗体的血清中PA含量测定的ELISA方法。最后，研究中还分析了三种文库来源的anti-HER3纳米抗体的亲和力，为将来选择不同类型的文库进行纳米抗体的筛选提供了一定的依据。本研究中构建的三种文库，尤其是天然和合成文库，将成为纳米抗体筛选的巨大文库资源，具有重要的应用潜力和价值。同时，鉴定获得的各种抗原特异性纳米抗体也将成为实际应用中的有力抗体工具，可以用于诊断试剂盒研发、免疫传感器搭建和疾病治疗等领域。