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目的:疼痛往往伴随有组织的损伤和炎症反应。目前疼痛,尤其是炎性疼痛的确切机制,尚未完全阐明。有研究表明,表观遗传学调控在炎性疼痛的发生和维持中,发挥了较为重要的作用。本研究从表观遗传学的角度,探索神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)基因启动子区低甲基化在炎性疼痛发生机制中的作用。方法:本实验分两个部分。第一部分:NGF基因启动子区低甲基化修饰及其机制研究。采用完全弗氏佐剂(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)足底注射建立大鼠炎性疼痛模型。采用甲基化特异性PCR(Methylation Specific PCR,MSP)和亚硫酸盐测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)观察了炎性疼痛状态下,NGF基因启动子区的甲基化状态的变化。采用western blot法和PCR法,进一步观察了CFA注射导致的DNA甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b,DNMT3b)表达的改变以及DNMT3b上游的调控因子miR-29b表达的改变。采用荧光素酶报告基因检测,验证miR-29b对DNMT3b mRNA 3’ UTR的结合以及对翻译的抑制作用。采用PC12细胞系,转染miR-29b类似物和抑制物后,检测细胞DNMT3b的蛋白表达水平的改变。第二部分:转录因子C/EBP α参与调控NGF基因表达的机制研究。采用染色质免疫共沉淀法,检测转录因子C/EBP α与NGF基因启动区结合的情况。分别采用western blot法和PCR法检测了炎性疼痛状态下转录因子C/EBP α蛋白和mRNA的表达水平的改变。在炎性模型大鼠DRG内注射C/EBP α siRNA,观察大鼠DRG内NGF表达的改变和行为学的改变。结果:CFA引起了明显的痛觉敏化以及L4-6 DRG内NGF蛋白和mRNA的持续上调。在CFA引起的炎性痛模型中,NGF基因启动子区CpG岛发生了去甲基化。此外CFA注射还引起了 miR-29b的表达水平的上调和DNMT3b表达的下调。研究还发现转录因子C/EBP α可以调控NGF的表达。CFA注射引起了 C/EBP α表达的上调以及与NGF基因启动子区结合的增强,而C/EBP α siRNA DRG内注射则逆转了炎性疼痛模型中NGF表达的增高,同时也抑制了炎性疼痛的痛觉敏化。结论:低甲基化修饰和转录因子C/EBP α的上调介导了 NGF表达水平的升高进而参与炎性疼痛的发生。CFA注射可以导致miR-29b表达水平上调,干扰了 DNMT3b的功能,导致NGF基因启动子区域低甲基化修饰,进而导致NGF表达的上调;同时,转录因子C/EBP α上调且与NGF基因启动子结合增强,也导致NGF基因表达上调,最终导致炎性炎性疼痛的发生。