目的1.构建正义、反义Id1真核表达载体,并成功转染胃癌SGC7901细胞系,筛选稳定表达的细胞株。2.探讨胃癌SGC7901细胞中,Id1对MMP9转录表达的影响。方法设计Id1基因两端的引物,高保真酶扩增Id1全长序列。将目的基因插入PCDNA3.1+/Hygro构建正义Id1真核表达载体,插入PCDNA3.1-/Hygro构建反义Id1真核表达载体。脂质体转染法转染胃癌SGC7901细胞系,潮霉素筛选稳定表达的细胞株。Western-Blot鉴定转染后胃癌细胞SGC7901中Id1表达活性的高低,RT-PCR法测定Id1不同表达水平的胃癌细胞中MMP9的转录水平,明胶酶谱法测定MMP9的表达活性。结果1.RT-PCR法获得长约530bp的Id1全长序列,经酶切及测序鉴定正确。成功构建正义、反义Id1真核表达载体。2.转染胃癌SGC7901细胞系。经过8W潮霉素筛选,获得稳定表达的细胞系。经Western-Blot鉴定,转染正义Id1真核表达载体的细胞系Id1表达水平高于对照组,而转染反义Id1真核表达载体的细胞系Id1表达水平低于对照组。3.RT-PCR法测定在转染正义、反义Id1真核表达载体、转染空载体的胃癌细胞中MMP9的转录水平。显示转染正义Id1真核表达载体的胃癌细胞,与转染空载体的胃癌细胞中MMP9在转录水平上的表达差别无显著性,而在转染反义Id1真核表达载体的胃癌细胞中,MMP9的表达水平显著降低。明胶酶谱显示不同组的转染细胞中,MMP9的活性差异有显著性。结论:胃癌细胞中Id1可能是MMP9的重要的上游体调控元件。