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目的探究双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)对原代培养的大鼠卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs)抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)表达以及小鼠卵巢原始卵泡体外发育、AMH表达的影响。方法1.第一部分实验:从21d SD雌性大鼠卵巢中提取卵泡GCs原代培养48h,先用HE染色检测GCs形态、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)细胞免疫荧光检测GCs纯度;然后根据分组即对照组(无试剂干预)、10-5 mol/L DHT组、10-8 mol/L DHT组、2×10-5 mol/L蛋白激酶B(AKT)抑制剂(MK-2206 2Hcl)组和10-8 mol/L DHT+2×10-5 mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂再干预GCs3h;干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化。Western blot测定各组AMH、p-AKT蛋白表达量。2.第二部分实验:3d的ICR小鼠卵巢取出后根据分组即对照组(无试剂干预)、10-8 mol/L DHT组、2×10-5 mol/L MK-2206 2Hcl组和10-8 mol/L DHT+2×10-5 mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预4d;HE染色后计数各组原始卵泡、早期生长卵泡在整个卵巢中的个数;免疫组化检测各组小鼠卵巢PCNA、AMH的表达;Western blot检测各组小鼠卵巢AKT信号通路相关因子(AKT、FoxO3a、PTEN)、AMH以及PCNA蛋白表达的变化。HE染色、免疫组化以及Western blot比较3d组和7d组小鼠卵巢原始卵泡、早期生长卵泡在整个卵巢中的个数、PCNA以及AMH等指标的变化。结果1.第一部分实验:AMH主要表达在大鼠卵泡GCs的细胞膜和细胞质中;与对照组比较,10-8 mol/L DHT和10-5 mol/L DHT均使GCs AMH表达增加(P<0.05),两种浓度DHT对GCs AMH表达的影响无统计学差异(P>0.05);与对照组比较,10-8 mol/L DHT使GCs的p-AKT、AMH表达升高(P<0.05),2×10-5 mol/L MK-2206 2Hcl使GCs的AMH表达降低(P<0.05);与MK-2206 2Hcl处理组比较,DHT+MK-2206 2Hcl处理组AMH表达升高(P<0.05)。2.第二部分实验:AMH主要表达在小鼠卵巢早期生长卵泡的颗粒细胞上,在原始卵泡上表达较少;经过DHT处理,小鼠卵巢生长卵泡数量、生长卵泡占总卵泡数的比例、PCNA、AMH、p-AKT、p-FoxO3a的表达升高(P<0.05),PTEN的差异无统计学意义(P>0.05);经过MK-2206 2Hcl的处理,小鼠卵巢早期生长卵泡数量、早期生长卵泡占总卵泡数的比例、PCNA、AMH、p-AKT表达降低(P<0.05);与MK-2206 2Hcl处理组比较,DHT+MK-2206 2Hcl处理组小鼠卵巢早期生长卵泡数量、早期生长卵泡占总卵泡数的比例、PCNA、AMH表达升高(P<0.05);7d组小鼠卵巢早期生长卵泡数量、早期生长卵泡占总卵泡数的比例、PCNA以及AMH表达量均高于3d组(P<0.05)。结论DHT不仅可以上调大鼠卵泡GCs和小鼠卵巢AMH的表达,还可以启动小鼠原始卵泡发育,且这些作用可能与激活AKT信号通路有关。