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羊膜组织来源丰富,近年来越来越受到人们的关注,与其他组织来源的干细胞相比,羊膜间充质干细胞具有无伦理限制、非侵入性、来源广泛、免疫原性低等优点。近年来,已有部分研究在细胞治疗时使用了犬的干细胞,但是其干细胞的来源较单一,大部分是从骨髓、脐血或脂肪组织中获取。因此,需要为犬的干细胞增加新的来源。大剂量化疗药物在对肿瘤细胞进行杀伤的同时,也对机体产生严重的骨髓抑制,血小板减少是明显的特征。除使用药物治疗外,干细胞移植逐渐用于骨髓损伤的治疗。本研究使用酶消化法从犬羊膜分离得到犬羊膜间充质干细胞(canine amniotic mesenchymal stem cells, cAMSCs),观察了不同代次的细胞形态,并绘制了第3及第9代细胞的生长曲线,通过免疫荧光和RT-PCR鉴定了cAMSCs分泌和表达干细胞相关蛋白和基因,通过流式细胞术鉴定了cAMSCs细胞表面标志,通过成骨、成脂、成神经和成胰岛诱导分化探索了cAMSCs的定向分化能力,使用环磷酰胺诱导小鼠血小板减少症,观察移植cAMSCs对小鼠血小板恢复的影响。结果显示,cAMSCs呈长梭形,可在体外连续传代培养,免疫荧光检测显示cAMSCs表达Vimentin和SSEA-4,流式细胞术检测显示cAMSCs高表达CD29、CD49d和CD73,低表达CD34、CD45和HLA-DR。RT-PCR检测显示cAMSCs表达干细胞标志基因OCT4、SOX2和NANOG,体外可成功诱导为成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和胰岛p样细胞,并在诱导后表达相应细胞的标志基因COL1A1、LPL、MAP2和INS, cAMSCs使血小板减少症小鼠的血小板数提前4d恢复至正常水平。结果表明,分离得到的cAMSCs可在体外分离培养,分泌和表达干细胞相关蛋白和基因,并具有向三个胚层细胞分化的能力。犬羊膜间充质干细胞,对于环磷酰胺所致小鼠血小板减少症,能够促进血小板的回升。