酒糟转化乙醇的菌株筛选及复合菌构建

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酒糟是白酒生产过程中最大的副产物,每年会产生数万吨的酒糟。酒糟是一种纤维类生物质,拥有巨大的回收潜力与应用前景,若未经过处理直接排放,会造成严重的资源浪费。现阶段,酒糟所含有的纤维素难以降解是影响其回收利用的重要因素。微生物降解法作为降解途径之一,具有绿色安全、降解彻底等优势,利用微生物法高效降解酒糟中的纤维素是酒糟再利用的第一步。本课题从堆积发酵的白酒糟、不同土样中分离纤维素降解菌,通过对菌株刚果红染色观察、酶活力测定、产酶条件优化、酶学特性研究、复合菌构建等,探索酒糟转化乙醇的再利用途径。主要研究结果如下:1.以堆积白酒糟、玉米田地土样、富含腐烂树枝叶的土样为实验样品,经过富集培养、稀释涂布后在CMC培养基上多次转接分离纯化,采用刚果红染色法筛选出19株出现透明圈较大的菌株,结合酶活力测定,复筛出4株产纤维素酶菌株JZ2、JZ3、YM7、YM9。经鉴定确定获得的纤维素分解菌JZ2、JZ3、YM9为芽孢杆菌Bacillus cereus,YM7鉴定为芽孢杆菌Bacillus toyonensis。2.采用单因素实验、响应面设计实验对所分离鉴定的4株芽孢杆菌产酶条件的发酵时间、摇床转速、培养温度进行了优化,确定了菌株JZ2的产酶条件为发酵时间1.86 d、摇床转速180 r/min、温度25.7℃,此条件下CMC酶活达到4.782 U/mL;菌株JZ3的产酶条件为时间1 d、转速184 r/min、温度28.5℃,CMC酶活为3.685 U/mL;菌株YM7最佳条件为发酵时间4.7 d、转速176 r/min、培养温度35.2℃,CMC酶活达3.253U/mL;菌株YM9最佳条件为时间2.6 d、转速185 r/min、温度20℃,此条件下的酶活力为4.487 U/mL。结合单因素及响应面优化实验结果,选择菌株JZ2进行下一阶段的实验。3.本章设计不同pH反应梯度(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0),不同温度反应梯度(20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃)对菌株JZ2酶学特性研究,结果表明,菌株JZ2在pH为6、温度为50℃的条件下酶活力最高。pH在3.0~6.0、温度在20~50℃范围内菌株JZ2所产生的纤维素酶稳定性很好。在此基础上,以乙醇含量为指标,选择接种方式、接种比例、接种时间三个因素对菌株JZ2和酿酒酵母复合发酵产乙醇的接种条件进行研究,得出复合菌的接种方式为先接入最佳产酶条件的菌株JZ2,然后接种酿酒酵母,比例为2∶1,接种时间为24 h。
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