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本文主要研究了嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia CGMCC 1.1788,R551-3和K279a菌株间羟基化烟碱类杀虫剂吡虫啉(Imidcloprid,IMI)的机制差异;从S. Maltophilia R551-3菌株中克隆和表达了8个单加氧酶基因,其中黄素单加氧酶Smal2279 蛋白具有IMI 羟基化活性。
S.maltophilia CGMCC 1.1788,R551-3和K279a 均具有羟基化IMI的能力,其中S.Maltophilia CGMCC1.1788的羟基化能力明显高于R551-3和K279a。细胞色素P450 酶抑制剂胡椒基丁醚(PBO)抑制S. Maltophilia CGMCC1.1788的IMI 羟基化活性,但不抑制R551-3和K279a的IMI 羟基化活性;黄素单加氧酶抑制剂甲硫咪唑(methimazole)均抑制三个菌株的IMI 羟基化活性。上述实验结果表明,在S. maltophiliaCGMCC1.1788 中存在细胞色素P450和黄素单加氧酶催化的两种IMI 羟基化机制。R551-3和K279a 蛋白组分析表明,K279a菌株中没有细胞色素P450 酶,其催化IMI 羟基化只有黄素单加氧酶参与。
上述结果也解释了S. Maltophilia CGMCC 1.1788 具有比其他两个菌株高得多的IMI 羟基化能力的原因。
S. Maltophilia 羟基化IMI所需的氧来自于空气中的氧分子,因而IMI 羟基化酶为单加氧酶类,从S. Maltophilia R551-3的全基因组中共检索到16个单加氧酶,从R551-3菌株中克隆单加氧酶基因,并在E.coli BL21(DE3)中进行异源表达,HPLC 分析测定酶活性。结果表明8个成功表达的单加氧酶中,只有含orf2279 表达蛋白的E. Cloi BL21(DE3)具有IMI 转化能力。液相色谱和质谱联用分析显示,转化产物的分子量为271(M+H),与5-hydroxy IMI的分子量一致,说明orf2279 蛋白具有IMI的羟基化功能。
Orf2279的生物信息学分析表明,orf2279 蛋白属于黄素单加氧酶类中的烷醛单加氧酶(Alkanal monooxygenase,也称之luciferase)。与其同源性最高的是Corynebacteriumglutamicum ATCC 13032的luciferase-like monooxygenase,同源性为46%。
已报道的烷醛单加氧酶的功能为催化长链烷醛基的氧化并释放出光以及催化S-氧化,S. Maltophilia R551-3的orf2279 蛋白催化IMI的碳-碳键的羟基化为该酶的一种新功能,目前尚未见有文献报道。