【背景和目的】系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)是以自身反应性T、B细胞异常活化、产生致病性自身抗体和免疫复合物为主要特征的一种慢性炎症性自身免疫病，可累及全身多系统、多器官，肾脏是最常见的受累器官之一。狼疮肾炎(Lupus Nephritis，LN)的发病机制迄今不明，其严重程度直接影响了SLE预后，约有10％～25％患者发展为终末期肾衰，成为SLE死亡的重要原因之一。Toll样受体(toll-like receptors，TLRs)是天然免疫中重要的病原体识别受体，通过识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)诱导免疫效应分子表达，激活多种前炎性因子参与抗感染过程。新近研究发现，TLRs与其相应的特异性配体(包括内源和外源性配体)结合，促进细胞膜表面共刺激分子和MHC-Ⅱ类分子表达，增强APC抗原呈递；此外，该过程中分泌大量Th1型细胞因子如IFNs，IL-6，IL-12和丁NF-a，直接调控CTL、B细胞等免疫细胞成熟和功能化，参与并调控特异性免疫应答过程，在天然免疫和特异性免疫之间架起桥梁。因此，TLRs与自身免疫性疾病的相关性日益受到关注。TLR家族成员TLR9因特异性识别细菌DNA和免疫复合物中非甲基化的CpG-DNA序列，启动MyD88依赖型信号转导途径，通过级联反应激活转录因子NF-κB、AP-1等，产生大量前炎症因子及活化免疫细胞，参与和介导了B细胞的活化、增殖及抗体产生，在自身免疫反应和炎症过程中发挥重要作用，故有研究者推测CpG-DNA/TLR9信号途径可能与SLE和LN发病机制密切相关。对TLR9的深入研究将进一步阐明狼疮的发病机制，病情活动和器官损害的基础，以及感染在发病过程中的潜在作用等，同时也为治疗提供新的思路。本研究分别采用细胞内流式细胞技术和免疫组织化学方法检测狼疮肾炎患者外周血B淋巴细胞及肾组织TLR9的表达情况，并分析其与疾病活动、脏器功能等临床指标的关系，探讨TLR9在LN中潜在的作用机制及其临床意义。【方法】(1)采用细胞内流式细胞术检测39例确诊的LN患者和18例健康人外周血CD19~+B淋巴细胞上TLR9的表达情况，并将LN患者按SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分标准分为活动期组和非活动期组，分别对各组B细胞上TLR9表达差异进行比较。此外对TLR9的表达情况与SLEDAI、补体C3水平做相关性分析。(2)采用免疫组化的方法对57例确诊的LN患者肾活检组织和11例正常肾组织进行TLR9检测分析，并根据ISN/RPS病理分型对TLR9在各型表达的程度和差异也进行比较。此外对TLR9的表达与肾脏组织病理学指标、临床实验室指标做相关性分析。【结果】(1)活动期LN患者(SLEDAI评分≥10)外周血CD19~+B细胞TLR9的表达率高于非活动期LN患者及正常对照组(P＜0.01)，而非活动期LN患者B细胞TLR9表达率虽高于正常对照组，但无统计学意义(P＞0.05)；且活动期LN患者中应用中小剂量激素和(/或)免疫抑制剂对TLR9在CD19~+B细胞的表达无显著影响(P＞0.05)。(2) LN患者外周血CD19~+B细胞TLR9的表达率与SLEDAI评分呈正相关(P＜0.01)；与血清补体C3水平无明显相关性(P＞0.05)。(3)正常肾组织中肾小球内无或有极少量TLR9表达，肾间质仅有少量浸润的细胞表达。与正常肾组织相比，各型LN患者肾组织中肾小球、肾间质TLR9表达均较正常肾组织增高(P＜0.05)，主要表达于肾脏浸润的细胞，且TLR9表达与肾脏病理类型的严重程度有关，其中ISN/RPS的Ⅳ型LN肾组织TLR9表达水平较Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型明显升高(P＜0.01)。(4) LN患者肾组织中肾小球TLR9表达水平与肾小球细胞增殖程度、LN肾脏病理活动指数(AI)呈正相关(P＜0.01)；肾间质TLR9表达水平与AI、肾小管间质损害程度也存在正相关关系(P＜0.01)。(1) LN患者肾组织中肾小球TLR9表达水平与估计的肾小球滤过率(eGFR)呈负相关(P＜0.01)、与24小时尿蛋白定量存在正相关(P＜0.05)，与血清补体C3水平无相关(P＞0.05)；而肾间质TLR9表达水平与eGFR呈负相关(P＜0.01)，与24小时尿蛋白定量、补体C3水平均无相关性(P＞0.05)。【结论】(1) TLR9在LN患者外周血B细胞表达上调，提示TLR9参与了LN患者B细胞的异常活化及LN的异常免疫过程。(2) TLR9在LN患者肾组织中表达增高，表达水平与LN患者肾脏病理损害严重程度相关。(3) TLR9在外周血B细胞及肾组织中的表达水平可作为判断LN患者疾病活动度、肾功能损害程度和临床预后的参考指标。