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本文针对造血干/祖细胞体外扩增对培养环境的需求,结合静/动态培养的特点,开发了一种新型的生物反应器,并籍此生物反应器比较了培养方式和循环培养流速对造血干/祖细胞体外扩增的影响.首先,采用SCF+TPO+Flt-3细胞因子组合,比较了静态和循环培养两种方式体外扩增脐血CD34+细胞的效果.培养7d后,总细胞分别扩增了(13.86±4.26)和(7.23±2.67)倍,显示静态培养有利于总细胞的扩增;CD34+细胞扩增倍数、培养物中CD34+细胞含量均相近,无显著性差异;而CD34+CD38-细胞扩增倍数以及培养物中CD34+CD38-细胞的百分含量分别为(1.82±0.58)和(3.90±0.85)倍以及(9.45±4.85)和(37.47±14.06)%,循环培养明显高于静态培养.可见,尽管采用静态和循环两种培养方式均能实现造血干/祖细胞的体外扩增,但静态培养促使造血干细胞向定向祖细胞分化,而循环培养则更有利于早期造血干细胞的扩增.其次,选择0.5、1.O、2.0mL/min三个流速,考察了循环培养条件下,培养基流速对造血干/祖细胞的体外扩增的影响,结果发现培养基循环流速对造血干/祖细胞的体外扩增没有显著性影响.
此外,还对已获临床应用批准的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒.巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),在造血干/祖细胞体外扩增中应用进行了初步的探索.以上研究结果有助于加快体外扩增造血干/祖细胞应用于临床的进程.