桔梗多酚的提取、纯化及抗氧化活性研究

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桔梗,是桔梗科(Campanuaceae)桔梗属(Platycodon)多年生草本植物,是我国药食同源的植物之一。桔梗富含皂苷、多酚、黄酮、多糖、萜类、甾体等成分,并含十余种氨基酸及镁、铁、锌等多种微量元素,食用部分主要为地下茎,性平,味苦、辛,归肺经,具有止咳、化痰、排脓等的作用。现代药理研究显示,桔梗具有保肝、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血糖、降血脂、调节免疫等功效。(1)通过预实验确定了桔梗中含有皂苷类、糖及苷类、多酚类、黄酮类、甾体及萜类、油脂类和有机酸等多种活性成分。通过比较乙醇回流提取法、超声波辅助乙醇提取和超声波辅助乙醇回流提取法,确定采用超声波辅助乙醇回流提取法作为桔梗多酚的提取方法。通过单因素试验及响应面优化法优化得到乙醇提取桔梗多酚的最佳工艺条件为超声时间32min,乙醇体积分数62%,液料比21:1(mL/g),提取温度62℃,超声功率为450W,浸提时间为1.5h,此条件下提取所得桔梗多酚的最大得率为1.647mg/g。(2)将桔梗多酚粗提液经过石油醚、乙酸乙酯萃取,再采用大孔吸附树脂对桔梗多酚进行了纯化。经比较,选择AB-8作为纯化用的树脂。最佳纯化条件为:pH值5.84,上样流速为1.0mL/min,吸附时间为1.0h;采用60%乙醇作为洗脱剂,用2BV的洗脱剂洗脱,洗脱时流速为0.6mL/min。在此条件下,纯化前桔梗多酚平均值由45.402mg/g可增加到94.013mg/g,总抗氧化能力平均值可由纯化前的60.167 U/mL提高到122.047U/mL。(3)通过葡聚糖LH-20凝胶对桔梗多酚进行分离,得到2个组分。利用紫外、红外光谱分析,结果桔梗多酚在280nmm处有最大的吸收峰,各功能团引起的振动特征吸收峰均符合多酚类物质的结构。通过HPLC测定,进一步验证出桔梗多酚样品中存在儿茶素和对羟基肉桂酸两种多酚类化合物。运用外标法计算出桔梗多酚中儿茶素为8.226μg/mL,对羟基肉桂酸为6.050μg/mL,分别占桔梗多酚总量的41.13%和30.25%。(4)采用同浓度的精制桔梗多酚和抗坏血酸,通过T-AOC试剂盒比较了两者的总抗氧化能力,精制桔梗多酚的总抗氧化能力不如抗坏血酸。通过清除02-·自由基、·OH自由基、DPPH自由基能力来研究桔梗多酚的体外抗氧化能力,结果表明自由基的清除率与样品浓度呈正相关。比较三种自由基的50%清除率的浓度(SC50)可知,·OH自由基清除率达50%时所需的桔梗多酚浓度最小,仅为0.11mg/mL。而O2-·自由基和DPPH自由基的SC50分别为0.19mg/mL和0.86mg/mL。说明桔梗多酚具有一定程度的抗氧化性。
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