论文部分内容阅读
ETS(E-twenty six)转录因子家族在多种生物学过程中扮演重要的角色,包括细胞增殖,分化,迁移,凋亡以及肿瘤的发生。Etv5(ETS variant 5)是ETS转录因子家族中的一员,它在精原干细胞,肿瘤细胞以及睾丸,卵巢等组织中广泛表达,与动物不育,前列腺癌,子宫内膜癌等多种发育过程及疾病发生密切相关。然而,Etv5在小鼠胚胎干细胞(m ESCs)中发挥的作用及机制尚未有明确的报道。本研究旨在确定Etv5在m ESCs中的表达特点,研究Etv5在mESCs中的调控功能,为探究mESCs多能性调控机制提供理论依据。本研究主要获得以下结果:1.Etv5在不同细胞系和组织中的表达谱分析利用Bio-GPS数据库,比较了Etv5在不同细胞系和组织中的表达情况,发现Etv5在多能干细胞和肺组织中高表达;应用Chip-seq数据库分析了Etv5在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的转录活性,发现Etv5在m ESCs中的转录活性更高;最后,通过RT-qPCR检测,发现Etv5在干细胞中的表达更高。2.Etv5对mESCs多能性的影响本研究建立了Etv5敲低mESCs(Etv5 KD mESCs),通过Ap染色,免疫荧光,RT-qPCR以及Western Blot等方法比较了Etv5敲低组和对照组的多能性差异,发现实验组和对照组在细胞形态,AP染色程度,多能基因表达等方面并没有明显差异。3.Etv5对lncRNA H19的调控作用本研究通过lncRNA高通量测序分析,比较了Etv5敲低组和对照组lncRNA的表达差异。通过散点图和热图分析,共找到16个差异表达的lncRNAs,包括7个上调lncRNAs,9个下调lncRNAs。通过RT-qPCR检测,分析了Etv5敲低组,Etv5回补组以及对照组中Etv5和H19的表达情况,发现Etv5和H19的表达负相关。4.Etv5对FGF/ERK信号通路以及Gata6的调控作用本研究建立了Etv5敲除mESCs(Etv5 KO mESCs),通过RT-qPCR和Western Blot检测,发现Etv5敲除实验组中Fgfr2和Gata6的表达明显下调;同时,ERK磷酸化(pERK)水平明显降低。利用PD抑制剂(PD0325901)处理mESCs,通过时间依赖性和浓度依赖性实验,发现pERK受抑制后,Etv5的表达明显下调。结论:本研究确定了Etv5在mESCs中的特异性高表达,证明了Etv5敲低对多能性维持没有显著的影响。证明了Etv5对H19的负调控作用;研究了Etv5通过FGF/ERK信号通路调控Gata6的表达,介导mESCs的原始内胚层分化。本研究丰富Etv5在mESCs中的调控功能,为研究胚胎早期发育过程中调控机制提供了理论依据。