粪便中隐孢子虫卵囊FTA/PCR检测方法的建立及初步应用

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隐孢子虫是一种重要的人兽共患性原虫,全球性分布,感染包括人在内的260多种家养以及野生动物。隐孢子虫属内具有遗传多样性,目前已命名38个有效虫种以及约60个基因型被描述。隐孢子虫病导致840万伤残调整生命年(Disability Adjusted Life Years, DALYs);在儿童,隐孢子虫是仅次于轮状病毒位居全球第二大最为重要的致腹泻病原。
  FTA卡作为商业化产品被广泛应用于多种病原微生物核酸的快速获取,而在隐孢子虫方面,该方法仅见于水源性隐孢子虫的检测。本论文参考先前的研究,使用纯化的隐孢子虫卵囊定量接种隐孢子虫阴性奶牛粪便样品,建立了基于隐孢子虫卵囊壁蛋白基因( COWP )检测粪便中隐孢子虫卵囊的FTA/PCR方法,其最低检测限为每克粪便中含100个隐孢子虫卵囊,该方法具有隐孢子虫特异性以及良好重复性。
  从河南省豫西地区即洛阳、南阳和三门峡共9个奶牛养殖场采集720份新鲜粪便样品,采用建立的FTA/PCR方法对该批样品进行检测和分析。结果显示,三个地区奶牛隐孢子虫平均感染率为9.44%(68/720);其中洛阳地区为10.74%( 29/270 )、南阳地区为5.83%( 14/240 )、三门峡地区为11.90%( 25/210 ) (卡方=5.68;p>0.05 )。三门峡养殖场 1 ( SMX1 )感染率最高达 14.67%(11/75),其次为洛阳养殖场2(LY2),感染率为14.29%(15/105)。断奶前犊牛、3-11月龄犊牛、1-2岁青年牛、大于2岁成年奶牛,其隐孢子虫感染率分别为20.98%、9.44%、5.95%、3.88%,不同年龄群奶牛隐孢子虫感染率具显著差异(p<0.01)。隐孢子虫病目前尚无有效药物,可通过及时清理粪便并搞好场内环境卫生,保持饲草料、饮水的清洁,消灭养殖场内的鼠类和苍蝇,增加营养和增强机体免疫力等途径对养殖场进行该病的预防。
  综上所述,本研究建立了基于隐孢子虫COWP基因的粪便中隐孢子虫卵囊FTA/PCR检测方法,该方法具有隐孢子虫特异性和良好的重复性,最低检测限为每克粪便含100个卵囊。利用建立的方法对豫西地区奶牛隐孢子虫流行情况进行了调查,研究发现流行趋势类似于我国其他地区。
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