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本试验目地旨在探讨玉米花粉多糖(PAM)的免疫增强作用机制,同时借此探讨机体免疫调节系统的基本工作模式。基本方法是监测大鼠肠绒毛微血管内皮细胞(REC)培养物中受一定浓度的PAM刺激后分泌免疫相关因子NO、IL-6、ET-1的浓度变化。首先提取PAM并进行纯化和含量测定。参考植物多糖提取的一般工艺进行改进,直接使用乙醇回流,然后再使用水提醇沉法。最后通过葡聚糖凝胶柱纯化,收集Molish反应阳性部分干燥备用。其次培养REC并进行纯化,用间接免疫荧光法等鉴定均显示阳性,由此确认得到内皮细胞。参考哺乳动物正常血糖水平,设计PAM原始工作浓度为100μg/ml,约为正常血糖水平的600～1000分之一,实际作用浓度在4～8μg/ml。当细胞层生长达80%时,消化并且收获细胞,做细胞计数,稀释到1×10~5/ml备用。取新细胞培养板,按照每孔0.5ml进行接种,继续培养。将预先升至室温的PAM溶液按照20μl的设计加入到各组细胞培养孔中。按照设计时间取样,经过3000rpm×5min离心,收取上清液冷冻存放备检。对样品中的一氧化氮采用硝酸还原酶法检测。结果试验组中的NO含量在可观察到的7小时以内均明显高于对照组,而且呈现剂量依赖性,但随时间延长,NO含量有逐渐下降的趋势。表明PAM的刺激导致REC分泌NO突然增加,然后逐渐减少;即PAM对REC的作用之一是导致REC分泌NO含量显著增加。对样品中的IL-6采用试剂盒ELISA法测定。试验组仍然明显高于对照组,且呈现相同的变化规律。对样品中ET-1采用试剂盒ELISA法测定。从第48小时后试验组均比对照组高,随时间延长呈明显上升趋势。综合分析试验结果,PAM刺激初期,REC呈爆发式分泌大量NO后逐渐减少NO分泌量;然后分泌较多的IL-6;在持续大约48小时左右,开始增加分泌ET-1并逐渐加强。从这些细胞因子的生理作用分析,受PAM刺激后,首先表现为血管壁的扩张,细胞间隙加大,促进炎性反应发生;然后表现为血管壁的收缩,控制漏出液,减轻炎性反应程度,即具有免疫增强作用的PAM接触到REC时会使REC分泌NO、ET-1等细胞因子情况发生变化。在体内,PAM产生刺激作用时可能伴随有血管壁自身的舒张与收缩运动。这说明PAM的免疫增强作用机制在于首先对REC分泌功能的调节,由此可以猜想内皮细胞在免疫调节中很可能处于某种关键地位。