苹果树腐烂病是由黑腐皮壳属真菌Valsa mali引起的苹果生产上的毁灭性病害。该病害发病率高、流行速度快,常造成整树死亡以及大面积毁园。目前该病的防控尚存在困难,对发病机制研究还需继续深入。研究表明,效应蛋白基因在病原菌与寄主互作过程中发挥着重要作用。对效应蛋白的研究首先需要克隆得到相应基因,本实验在前期完成的苹果树腐烂病菌基因组测序的基础上,对根据基因组预测的119个候选效应蛋白基因进行克隆建库为后续试验室研究工作提供充足的材料库。并且对库中Nis1与Neps类效应蛋白的同源基因进行了初步的功能验证,主要研究结果如下:1.分别用TA克隆法与一步克隆同源重组法将待筛的预测基因克隆至PGR106载体和PCHF3载体上,共候选119个效应蛋白基因进行克隆,最后测序确认78个基因成功克隆到PGR106载体,92个基因成功克隆到PCHF3载体。初步建立候选效应蛋白基因库,为后续研究提供材料基础。2.从构建库中筛选了Neps同源基因VM1G＿10052和Nis1同源基因VM1G＿07228进行初步基因功能验证,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达发现,VM1G＿07228可以引起坏死,而VM1G＿10052无明显反应。3.通过PEG介导的原生质体转化对具有引起坏死功能的VM1G＿07228进行基因敲除,从178个转化子中获得两个基因缺失突变体#45和#106。通过两个突变体在枝条和叶片上接种和致病力分析试验发现,该基因并未引起Valsa mali的致病力改变。