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该文采用培养的大鼠皮质神经元缺氧缺糖(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)模型,研究了缺氧缺糖诱导神经元损伤和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate;NMDA)受体2A亚基酪氨酸磷酸化变化,以及NR2A亚基与Src、PSD-95和Pyk2的相互作用;研究了Ca<2+>螯合剂、NMDA受体拮抗剂、L-型电压门控钙通道(L-type voltage-gated calcium channel;L-VGCC)拮抗剂及蛋白酪氨酸激酶(Protein tyrosine kinase,PTK)和CaMKⅡ的抑制剂、Src家族酪氨酸蛋白激酶(Src family protein tyrosine kinases;SrcPTKs)对上述作用的影响;研究了PSD-95和Pyk2的反义寡核苷酸对上述作用的影响,旨在探讨NMDA受体酪氨酸磷酸化在缺血性脑损伤中的作用及其分子机制,为脑缺血临床治疗提供必要的实验基础和理论依据.1.缺氧缺糖/再灌诱导神经元的凋亡;皮质神经元缺氧缺糖/再灌不同时间(6,12,18,24,36,48小时),以DAPI染色检测神经元凋亡.2.缺氧缺糖/再灌诱导NR2A酪氨酸磷酸化的变化;皮质神经元缺氧缺糖/再灌不同时间(1,6,12,18,24小时),以抗磷酸酪氨酸抗体(pY)免疫沉淀,抗NR2A抗体免疫印迹分析.3.SrcPTKs在缺氧缺糖/再灌NMDA受体通道酪氨酸磷酸化调节和神经元损伤的作用及机制;以抗Src抗体免疫沉淀,抗NR2A抗体免疫印迹分析,缺氧缺糖/再灌诱导Src与NR2A相互作用增强.4.PSD-95在培养的皮质神经元缺氧缺糖/再灌后对NMDA受体亚基NR2A酪氨酸化调节和神经元损伤作用的调节及机制;以抗PSD-95抗体免疫沉淀,抗NR2A抗体免疫印迹分析,缺氧缺糖/再灌诱导PSD-95与NR2A相互作用增强.5.Pyk2在培养的皮质神经元缺氧缺糖/再灌后对NMDA受体亚基NR2A酪氨酸化调节及机制和神经元损伤的作用;以抗Pyk2抗体免疫沉淀,抗NR2A抗体免疫印迹分析,缺氧缺糖/再灌诱导Pyk2与NR2A相互作用增强.综上所述,SrcPTKs、PSD-95、Pyk2参与介导缺氧缺糖/再灌后NMDA受体亚基NR2A的酪氨酸磷酸化及受体功能和神经元损伤的调节.上述结果显示,SrcPTKs的抑制剂及PSD-95、Pyk2的反义寡核苷酸具有保护脑缺血神经元损伤作用,为开发治疗脑缺血药物提供理论依据.