心血管疾病是造成我国人民死亡的一类重要疾病，除了通过临床症状和身体特征等的表现来判断外，对各类心肌损伤蛋白标志物的检测也是一种很可靠的方法。对血清中的感染成分进行检查时，对急性时相反应蛋白(APR)的检查一方面可以使冠状动脉疾病(CAB)得到早期预防，另一方面便于医生在临床上采取对应的治疗措施。急性时相反应蛋白通常分为两类:一类的浓度随损伤程度的增加而上升;另外一类的浓度随损伤程度的增加而降低。近年来，第一类APR（C反应蛋白和纤维蛋白原等）受到了广泛的关注，而第二类APR（人血清白蛋白和转铁蛋白等）的研究却鲜有报道。本文对人血清白蛋白（hALB）和人转铁蛋白(hTRF)的准确测定研究有助于心肌损伤程度的判断，从而能够指导后续的用药与治疗，在诊断心脏疾病、评估危险性、观察疗效等方面将起到重要作用。　　首先，采用同位素稀释质谱法和质量平衡法对hALB和hTRF纯品含量测定进行了研究。通过对两种蛋白的水分、灰分和纯度的准确测定，采用质量平衡法得出两种蛋白纯品的含量分别为0.861 g/g和0.825 g/g。同时对hALB和hTRF蛋白纯品的水解时间进行了优化，建立了一种基于标记氨基酸的同位素稀释质谱法对两种蛋白纯品的含量进行了测定，结果分别为0.853 g/g和0.830 g/g;并对方法的重复性、再现性、准确性及不确定度进行了评价，两种蛋白含量测定方法的相对扩展不确定度均为1.7％(k=2)。建立的同位素稀释质谱法具有操作简单、方法灵敏、准确性高、重现性好的优点，且定量结果可以溯源到SI单位，可作为蛋白纯品标准物质的定值方法，同时为后续基体中蛋白含量准确测定工作奠定了基础。　　其次，通过同位素亲和标签技术(TMT)建立了血清中蛋白标志物的同位素稀释质谱含量准确测定方法。首先采用TMT标记试剂标记hTRF，对hTRF纯品和人血清分别进行还原烷基化并用TMT试剂分别标记后混合，采用Glu-C酶切得到肽段混合物，通过纳升液相分离后将不同组分收集到靶板上，然后通过MALDI-TOF-MS/MS对各组分进行分析检测，检测结果由二级质谱中报告离子的比例经过运算得到。在实验过程中，通过对肽段混合物的分析选择出了3条特异性肽段用于定量;优化了标记试剂的用量，发现标记试剂与蛋白质量比为64∶1时，标记效率可达到近乎100％;同时对报告离子的同位素丰度纯度进行了测定和校正，发现校正报告离子的平均表观纯度为94.91％。最后对人血清中的hTRF含量进行了准确测定并对方法学参数进行了研究，发现当血清中hTRF含量为2.08 mg/g时的回收率为95.51％到105.45％。由于定量过程中采用经同位素稀释质谱方法定值的纯品hTRF作为标准，使得血清中hTRF的定量结果可以溯源到SI单位，定量结果具有较高的准确度。实验中还采用ELISA商业试剂盒测定了人血清中hTRF的含量并与同位素稀释质谱法得到的结果进行了比较。ELISA法测定结果平均值为2.03mg/g，与同位素稀释质谱法结果进行t检验其p值为0.1543，说明所建立的同位素稀释质谱法准确性高、重现性好，为其它基体中不同蛋白的准确测定奠定了基础。　　最后，建立了化学发光免疫印迹测定人血清中hTRF的方法。以经同位素稀释质谱法定值的hTRF为外标，在多种抗体中选择特异性较强的一抗HTF-14，优化抗体的稀释比例为1∶25，优化样品的稀释度为1∶20，选择还原变性的前处理方法，采用化学发光免疫印迹法测定血清中hTRF含量，通过化学发光图谱中目标峰的峰面积计算得到人血清中的hTRF含量为2.03 mg/g，并分别与商业ELISA试剂盒和同位素稀释质谱法定量结果进行t检验，p值均大于0.05，说明建立的化学发光免疫印迹方法具有高准确度和高灵敏度的优点。同时，研究讨论了蛋白聚体和代谢碎片对血清中hTRF定量的影响，发现蛋白聚体与代谢碎片对定量结果的影响不大，所得定量结果重复性好、准确性高、灵敏度高、加标回收率好。所建方法采用经同位素稀释质谱定量的hTRF纯品作为外标，因此血清中hTRF的定量结果也可溯源到SI单位，为血清中蛋白标志物的准确定量及互通性研究奠定了基础。