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核酸疫苗是90年代兴起的新型疫苗,已在多种疾病的防治中显示出巨大的潜能。新一代DNA疫苗能全面的诱发免疫反应,且生产易于标准化,从而得到人们的重视。随着核酸疫苗研究的不断深入,一个又一个预防动物传染性疾病的核酸疫苗将应运而生。本实验针对犬传染性疾病预防需要新型核酸疫苗这一趋势,进行了如下研究:①构建预防犬传染性肝炎的核酸疫苗pVAX1-CpG-Loop,并对其免疫效果进行评价;②构建原核蛋白表达质粒pET28a-Loop,表达、纯化Loop蛋白;③制备鼠抗Loop蛋白单克隆抗体并对克隆细胞株进行鉴定。犬传染性肝炎是由犬传染性肝炎病毒感染引起。犬传染性肝炎病毒又称犬腺病毒(Canine adenovirus,CAV),属于腺病毒科哺乳动物腺病毒属成员,是已发现的哺乳动物腺病毒属中致病性最强、形态结构研究得较清楚的一种动物病毒[1]。犬腺病毒广泛分布于全世界,是对我国养犬业、毛皮动物养殖业危害最大的疫病之一。CAV分为两种抗原相关型,即犬腺病毒I型(CAV-1)和犬腺病毒II型(CAV-2)。其中CAV-1称犬传染性肝炎病毒(CIHV),主要引起犬传染性肝炎和熊、狐脑炎。Loop1、Loop2为犬传染性肝炎病毒中和抗原决定簇,本研究设计并合成了Loop1和Loop2基因,连接两个基因命名为Loop ,①将Loop克隆到质粒载体pVAX1-CpG ,构建核酸疫苗pVAX1-CpG-Loop。采用脂质体体外转染,共聚焦观测结果显示构建的真核表达质粒可表达目的蛋白;采用ELISA法测定抗体效价,流式细胞检测CD4+和CD8+构成比,IFN-γ测定和中和抗体检测等实验方法,对pVAX1-CpG-Loop诱导小鼠的免疫效果进行了评价,结果显示各实验组小鼠均可产生体液免疫和细胞免疫应答。②将Loop基因片段克隆到质粒pET28a载体,构建原核表达质粒pET28a-Loop,表达Loop蛋白,制备了抗Loop蛋白的单克隆抗体,得到四株能产生中和抗体的克隆株,其中2-7F9,2-1B1中和抗体效价较高,可作为单抗诊断、治疗犬传染性肝炎的候选克隆株。