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目的:探讨1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)对食管鳞癌细胞系Eca109细胞周期,细胞周期相关调控因子p21CIP1/WAF1(p21)和p27KIP1(p27),以及迁移的影响,为食管癌等肿瘤的发病机制、诊断、治疗、预后判断提供新思路。方法:1.以LipofectamineTM 2000作为转染试剂,将S1PR1与EGFP融合表达载体S1PR1-EGFP、对照载体Control-EGFP分别转染食管鳞癌Eca109细胞进行瞬时表达,选择转染后12h、24h、48h三个时间点用激光共聚焦显微镜观察融合荧光蛋白的表达及定位。2.采用流式细胞术检测S1PR1-EGFP、Control-EGFP载体转染后12h、48h Eca109细胞的细胞周期分布。3.采用实时定量RT-PCR(q RT-PCR)检测S1PR1-EGFP、Control-EGFP载体转染后48h的Eca109细胞中两种细胞周期调控因子p21和p27 m RNA的表达水平。4.采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测S1PR1-EGFP、Control-EGFP载体转染后48h的Eca109细胞中p21、p27蛋白表达水平。5.采用Transwell迁移实验,检测S1PR1-EGFP、Control-EGFP载体转染后48h的Eca109细胞的迁移能力。结果:1.食管鳞癌Eca109细胞分别转染S1PR1-EGFP、Control-EGFP载体后,激光共聚焦显微镜显示:转染后12h,S1PR1-EGFP组绿色荧光主要分布于细胞膜上,细胞浆和细胞核内未见;转染后24h,S1PR1-EGFP组绿色荧光分布于细胞膜和细胞浆;转染后48h,S1PR1-EGFP组绿色荧光主要分布在细胞浆中;在转染后12h、24h、48h这三个时间点中,Control-EGFP组绿色荧光均分布于细胞浆和细胞核。2.流式细胞术检测细胞周期结果显示,转染后12h,S1PR1-EGFP组和Control-EGFP组G1期细胞所占比例分别为(67.75±2.80)%和(46.23±4.37)%(P<0.01);转染后48h,S1PR1-EGFP组和Control-EGFP组G1期细胞所占比例分别为(30.64±1.91)%和(42.99±3.53)%(P<0.01)。3.q RT-PCR检测转染后48h Eca109细胞p21、p27 m RNA的表达水平,结果显示,S1PR1-EGFP组p21、p27的表达水平明显低于Control-EGFP组(P<0.01)。4.Western blot检测转染后48h Eca109细胞p21、p27蛋白的表达水平,结果显示,S1PR1-EGFP组p21、p27蛋白的表达水平明显低于Control-EGFP组(P<0.01)。5.Transwell迁移实验检测转染后48h的Eca109细胞迁移能力,结果显示,S1PR1-EGFP组穿过基底膜的细胞数明显多于Control-EGFP组(P<0.01)。结论:1.S1PR1-EGFP载体转染后48h,融合荧光蛋白主要表达于细胞浆,与之前免疫组化和免疫细胞化学检测到的S1PR1在食管鳞癌组织和细胞中的表达定位一致,以此作为研究的主要时间点。2.细胞浆S1PR1能通过促进细胞从G1期过渡到S期,增强Eca109细胞的增殖。3.细胞浆S1PR1能下调细胞周期调控因子p21、p27 m RNA和蛋白表达,可能以此促进细胞周期G1/S期过渡,增强Eca109细胞增殖。4.细胞浆S1PR1能增强Eca109细胞的迁移能力。