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目的:研究紫朱软膏在非缺血性糖尿病足溃疡患者炎症期的临床疗效,并在糖尿病足溃疡大鼠模型上探索Notch信号通路对炎性因子和巨噬细胞表型极化的影响及紫朱软膏的干预作用。方法:第一部分临床研究通过随机对照试验,选择非缺血性糖尿病足溃疡患者,以炎症期为观察窗,研究紫朱软膏对非缺血性糖尿病足溃疡患者炎症期创面愈合的影响。第二部分实验研究1以糖尿病足溃疡大鼠模型为实验对象,通过高脂饲料饲养SD大鼠8周联合STZ 35mg/kg注射造成糖尿病模型,用烫伤仪4cm~2探头烫伤建立糖尿病足溃疡作为实验模型。采用普通饲料喂养8周后烫伤仪4cm~2探头烫伤,制成普通溃疡模型作为对照组模型。2根据干预因素将72只大鼠随机分为9组:普通溃疡模型对照组（NC）、普通溃疡模型紫朱软膏组（NT）、实验模型对照组（DC）、实验模型紫朱软膏组（DT）、实验模型西药组（DW）、实验模型+激动剂+紫朱软膏（DT-A）、实验模型+激动剂（DC-A）、实验模型+抑制剂+紫朱软膏（DT-I）、实验模型+抑制剂（DC-I）,每组8只,干预1周后处死取材。采用酶联免疫吸附试法（ELISA）检测各组血清炎症相关因子:白细胞介-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-17A（IL-17A）;实时聚合酶链反应技术（Real-Time PCR）检测创面组织Notch信号相关的炎性因子和趋化因子:TNF-α、TGF-α、TGF-β、IL-1β、Il-6、IL-17、白介素-8（lnterleukin-8,IL-8）干扰素-Y诱生蛋白（interferon-γinducibleprotein,IP-10）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractantprotein-1,MCP-1）;蛋白质印迹法（Western-Blot）检测大鼠皮肤组织NF-κB/MAPK信号通路蛋白（IKBa、p-IKBa、p65,p38含量）,流式细胞检测大鼠外周血巨噬细胞M1/M2的阳性率。3通过NC、DC、DC-A、DC-I、DT各组比较,探讨糖尿病足溃疡大鼠模型创面愈合的炎症期Notch信号通路对炎症因子对巨噬细胞极化的调控作用。通过DC、DC-A、DC-I、DT、DT-A、DT-I组的比较,探讨紫朱软膏对Notch信号通路相关炎症因子表达及巨噬细胞表型极化的的干预作用。从而研究在糖尿病足溃疡炎症期,Notch信号通路对炎症因子和巨噬细胞表型极化的影响,以及紫朱软膏对该过程的干预作用。结果:1临床研究结果:1.1试验组与对照组比较,治疗后试验组创面面积小于对照组（8.42±1.90VS 9.68±2.71,P=0.022）,前后面积差值变化优于对照组（1.78±1.15 VS 1.15±1.07,P=0.044）。试验组创面治疗后分泌物（2.16±0.55 VS 2.79±0.99,P=0.001）,治疗前后的分泌物差值（1.26±0.98 VS 0.68±0.9,P=0.011）,血清TNF-α（30.07±8.90 VS 34.87±9.10,P=0.016）均优于对照组。2实验研究结果:2.1血清ELISA结果显示:实验模型的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17水平明显高于普通溃疡模型;Notch信号通路抑制剂LY-411575能降低血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17A含量。说明抑制Notch信号能够明显降低炎症因子的表达。紫朱软膏能够降低试验组糖尿病足大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17水平。除Jagged1能协同增加紫朱软膏对TNF-α降低作用外,Jagged1与LY-411575均能减小紫朱软膏的炎症因子降低幅度,此外LY-411575与紫朱软膏在降低IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17A方面存在互相拮抗的现象。说明紫朱软膏能够抑制Notch信号的对炎症因子的促表达作用。2.2创面组织Real-time PCR结果:实验模型创面组织的炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1水平明显高于普通溃疡模型,而生长因子TGF-β水平低于普通溃疡模型。Notch信号通路抑制剂LY-411575明显降低糖尿病足溃疡大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1含量,降低了TGF-α、TGF-β表达。Notch信号通路激动剂Jagged1能增加TGF-α、TGF-β表达,表明抑制Notch信号通路能够降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17A、IL-8和生长因子TGF-α、TGF-β表达,激活Notch则能增加生长因子TGF-α、TGF-β的表达。激活Notch信号也出现了炎症因子表达降低趋势,可能存在某种对Notch信号负反馈机制。紫朱软膏能够降低试验组糖尿病足大鼠创面IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1水平,提高TGF-α、TGF-β表达。Jagged1能够协同增强紫朱软膏对IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17和趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1的降低作用,而LY-411575则与紫朱软膏在降低上述炎症及趋化因子上存在互相拮抗的现象。Jagged1能协同增加紫朱软膏对TGF-α、TGF-β促表达作用,LY-411575抑制紫朱软膏对TGF-α、TGF-β促表达作用。说明紫朱软膏能够降低糖尿病足溃疡大鼠炎症因子和趋化因子表达,提高生长因子表达,减轻创面炎症反应强度,其作用途径可能与抑制Nocth信号通路表达有关。2.3蛋白质印迹（Western-Blot）检测结果:实验模型创面P38 MAPK、NF-κB P65表达高于对照模型;Jagged1能增加P38 MAPK、NF-κB P65的表达,LY-411575降低P38 MAPK、NF-κB P65的表达,说明Notch信号通路激活能够促进P38 MAPK、NF-κB P65表达。对NF-κB IKBa、P-IKBa的调控作用不明显。说明Notch信号通路激活/抑制能够促进/降低P38 MAPK、NF-κB P65炎症信号的表达。2.4流式细胞检测结果:试验模型的巨噬细胞M1阳性率高于普通溃疡大鼠,M2阳性率低于普通溃疡大鼠;LY-411575能够降低M1阳性率,提高M2阳性率,这与血清创面组织的炎症因子的结果趋势一致。说明炎症因子表达增高与M1活化有关。同时紫朱软膏能降低实验模型大鼠巨噬细胞M1阳性率,提高M2阳性率。结论:1.紫朱软膏结合中医外科技术能明显减小炎症期糖尿病足溃疡创面面积,促进创面分泌物释放,加快炎性渗出,从而促进创面愈合,具有良好的临床疗效。2.糖尿病足溃疡大鼠模型较普通溃疡模型炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17,趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1表达偏高,生长因子TGF-α、TGF-β表达偏低,巨噬细胞M1活化增加,M2活化降低。3.抑制Notch信号通路能够降低糖尿病足溃疡炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17,趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1水平,降低生长因子TGF-α、TGF-β表达,下调巨噬细胞M1活化,上调M2活化,同时降低P38 MAPK、NF-κB P65炎症信号的表达,说明Notch信号通路具有促进溃疡炎症和促进细胞增殖作用。4.紫朱软膏能降低糖尿病足溃疡模型的炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17,趋化因子IP-10、IL-8、MCP-1水平从而降低炎症反应强度,提高生长因子TGF-α、TGF-β表达促进创面愈合。5.紫朱软膏能够抑制Notch信号通路的对炎症因子的上调作用,增强其对生长因子的上调作用;能够抑制Notch信号通路对巨噬细胞M1活化,提高M2活化。这可能是紫朱软膏促进糖尿病足溃疡愈合的机制之一。