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地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)是玄参科地黄属,多年生草本植物,是我国常用大宗中药材之一。萜类化合物是地黄次生代谢产物之一,也是地黄的主要药用成分。HDR、GES、G10H是植物萜类化合物合成途径中的相关酶,本研究克隆获得了地黄HDR、GES、G10H基因,分析了不同品种、不同生长时期及不同组织下基因的表达情况。同时,构建了HDR、GES、G10H基因的植物过表达载体,并获得了转基因拟南芥阳性植株,为地黄萜类化合物生物合成的研究奠定了基础。主要研究结果如下:
1、从地黄中克隆了HDR、GES、G10H基因,并进行了生物信息学分析。HDR基因CDS为1392bp,编码463个氨基酸;GES基因CDS为1749bp,编码582个氨基酸;G10H基因CDS为1473bp,编码490个氨基酸。地黄HDR、GES基因编码蛋白无信号肽,亚细胞定位在叶绿体中,而G10H编码蛋白亚细胞定位在线粒体中,而且存在信号肽。
2、地黄HDR、GES、G10H基因的表达具有品种特异性及时空特异性。在地黄的同一生长时期,HDR基因在叶中的表达高于根和茎。GES基因在叶中的表达显著高于根和茎。G10H基因则在地黄的叶中的表达最高。地黄HDR、GES及G10H基因在85-5各组织中的表达普遍高于金九,且基因在地黄叶中的表达量均高于根、茎。
3、地黄环烯醚萜苷的积累与相关酶基因有关,地黄根中,G10H、DXS、DXR和GPPS基因的表达和环烯醚萜苷积累呈现正相关,地黄叶中,HDR和GES基因表达和环烯醚萜苷积累始终呈现正相关,推测目的基因HDR、GES、G10H可能与DXS、DXR和GPPS基因通过协调作用来调控环烯醚萜苷积累。
4、分别成功构建了HDR、GES及G10H基因的植物过表达载体,将pCAMBIA1300-RgHDR-GFP和pCAMBIA1300-RgG10H-GFP植物表达载体转化野生型拟南芥,将pCAMBIA1300-RgGES-GFP植物表达载体转化拟南芥突变体,分别获得4株、8株和5株转基因拟南芥纯合株系。
5、与野生型拟南芥相比,培养基上RgG10H转基因拟南芥幼苗的叶较大、较绿,根较粗、根须较多,而且出花序的时间也较晚。但是,移栽到土壤中后野生型拟南芥的长势较优、植株较高,薹较粗壮,出薹数较多,且花序较大,表明地黄G10H基因的过表达对拟南芥的生长发育有一定程度影响,可能抑制了拟南芥花的形成。
1、从地黄中克隆了HDR、GES、G10H基因,并进行了生物信息学分析。HDR基因CDS为1392bp,编码463个氨基酸;GES基因CDS为1749bp,编码582个氨基酸;G10H基因CDS为1473bp,编码490个氨基酸。地黄HDR、GES基因编码蛋白无信号肽,亚细胞定位在叶绿体中,而G10H编码蛋白亚细胞定位在线粒体中,而且存在信号肽。
2、地黄HDR、GES、G10H基因的表达具有品种特异性及时空特异性。在地黄的同一生长时期,HDR基因在叶中的表达高于根和茎。GES基因在叶中的表达显著高于根和茎。G10H基因则在地黄的叶中的表达最高。地黄HDR、GES及G10H基因在85-5各组织中的表达普遍高于金九,且基因在地黄叶中的表达量均高于根、茎。
3、地黄环烯醚萜苷的积累与相关酶基因有关,地黄根中,G10H、DXS、DXR和GPPS基因的表达和环烯醚萜苷积累呈现正相关,地黄叶中,HDR和GES基因表达和环烯醚萜苷积累始终呈现正相关,推测目的基因HDR、GES、G10H可能与DXS、DXR和GPPS基因通过协调作用来调控环烯醚萜苷积累。
4、分别成功构建了HDR、GES及G10H基因的植物过表达载体,将pCAMBIA1300-RgHDR-GFP和pCAMBIA1300-RgG10H-GFP植物表达载体转化野生型拟南芥,将pCAMBIA1300-RgGES-GFP植物表达载体转化拟南芥突变体,分别获得4株、8株和5株转基因拟南芥纯合株系。
5、与野生型拟南芥相比,培养基上RgG10H转基因拟南芥幼苗的叶较大、较绿,根较粗、根须较多,而且出花序的时间也较晚。但是,移栽到土壤中后野生型拟南芥的长势较优、植株较高,薹较粗壮,出薹数较多,且花序较大,表明地黄G10H基因的过表达对拟南芥的生长发育有一定程度影响,可能抑制了拟南芥花的形成。