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新疆野苹果(Malus sieversii)是分布在伊犁地区的新疆野果林的主要建群种,是世界罕见的苹果天然基因宝库也是重要的种质基因库,然而,近半个世纪以来,野苹果林因病害枯死率高达80%。木霉菌(Trichoderma)是一种应用前景广阔的植物病害生物防治菌,1932年,Weindling发现木霉菌具有对病原菌拮抗作用,自那时起国际上已经有100余种以木霉为主要成分的商品制剂,广泛应用于防治农业林业植物病害。其中主要被推广的剂型有可湿性粉剂,颗粒剂和微胶囊剂等等。本研究首先探究出了一种以稻草,麦麸为主的菌袋形式的大量有效生产木霉孢子粉的哈茨木霉T2菌株固态发酵工艺,然后以该工艺生产出的哈茨木霉分生孢子粉为孢子原粉,对哈茨木霉可湿性粉剂加工工艺进行了初步探究,并对最终研发出的剂型对由链格孢茵(Alternaria alternata)引起的新疆野苹果叶枯病进行了药效检测。通过对哈茨木霉T2菌株分生孢子粉菌袋形式固态发酵工艺的优化,最终筛选出配比为57%稻草,40%麦麸,1%黄豆粉,1%玉米面,1%NH4N03和75%含水量,每袋装入200g的发酵料配方。接种孢子悬浮液后28℃培养8 d后为最佳收获时间。自然条件下干燥收获的孢子粉经振动筛分机筛分再过200目筛即为哈茨木霉孢子粉原粉。最终获得的孢子粉含水量为2.63%,含孢量为1.64×1012个/g,孢子萌发率达到99.25%。为进一步制剂加工提供依据。利用稻草为主的哈茨木霉菌袋形式固态发酵工艺获得优质哈茨木霉T2菌株孢子粉作为原粉,对高岭土,膨润土,凹凸棒土,硅藻土为载体,EFW,MF-5,SDS和拉开粉为润湿剂,NNO,木质素磺酸钙和木质素磺酸钠为分散剂,荧光素钠,糊精,VC和氧化锌为紫外线保护剂的助剂进行了筛选。在初步筛选与正交实验筛选后,结果表明1%MF-5,5%木质素磺酸钙,0.3%糊精,以载体硅藻土补全100%的10%哈茨木霉T2可湿性粉剂为最优。对该可湿性粉剂的质量检测结果显示,润湿时间为5.89s,质量悬浮率79.79%。对该配比的剂型进行了其他指标的检测,其中细度(过325目标准筛,平均粒度为28 μm)>98%,pH值为6.5,4℃条件下12个月后孢子萌发率为95.12%,符合国家对于真菌可湿性粉剂的制定标准。通过对哈茨木霉T2分生孢子可湿性粉剂喷施新疆野苹果苗后接种链格孢菌对其进行了药效检测。(1)接种7 d后的发病程度观察显示哈茨木霉T2分生孢子可湿性粉剂可以将由链格孢菌引起的新疆野苹果发病程度由3级降低为1级;接种7 d后对新疆叶片背面的气孔进行了显微观察,结果表明哈茨木霉T2可湿性粉剂能够抑制链格孢菌对野苹果叶片气孔保卫细胞的侵染,维持其正常形态。(2)该制剂还可以有效提高新疆野苹果叶片内过氧化氢酶(Catalase,CAT)酶活,降低 H2O2与丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,与单独接种链格孢菌的新疆野苹果处理组相比,提前喷施哈茨木霉T2可湿性粉剂的新疆野苹果苗处理组的CAT活性明显增高,且在2 d的时候达到最高为212.44 μmol/g,是单独接种链格孢菌的新疆野苹果处理组的2.61倍,其H202含量比之在6 h降低了 26.89 μmol/g。其MDA含量在1 d时比之降低60.724μmol/g。Evans blus 和 nitroblue tetrazolium(NBT)染色实验得到了相同的结论,叶片细胞坏死的部分较少,再次说明哈茨木霉T2可湿性粉剂提高新疆野苹果防御酶活性,降低了活性氧的积累。(3)荧光定量RT-qPCR检测了喷施哈茨木霉T2可湿性粉剂与接种链格孢菌四组处理对新疆野苹果叶片抗性相关基因表达水平的影响,对水杨酸途径相关基因PR1与NPR1来说,单独喷施哈茨木霉T2可湿性粉剂后新疆野苹果叶片内NPR1基因整体呈现负调控的趋势,在6 h达到最低水平-0.24倍,抗性基因PR1则维持了一个较高的表达水平并在1 d的时候达到最高表达水平2.38倍。对茉莉酸途径相关基因MYC2,COI与JAZ来说,喷施哈茨木霉T2可湿性粉剂后再接种链格孢菌对新疆野苹果中抗性基因MYC2在6 h,1 d和2 d时表达水平较高并在1 d的时候达到最高表达水平2.43倍。COI基因表达量上调并且在2 d达到最高表达最高水平4.05倍,JAZ基因表达上调并在6 h达到最大表达水平3.30倍,整体呈现上调趋势。对生长素相关基因LAX来说,在接种链格孢菌前提前喷施哈茨木霉T2可湿性粉剂则使得LAX基因表达上调并在4 d达到最大表达水平6.42倍,同样呈现正调控的趋势。总之,以稻草和麦麸为主的菌袋形式哈茨木霉T2固态发酵为木霉菌的固态发酵工艺提供了新思路;针对新疆野苹果的哈茨木霉T2可湿性粉剂适用于新疆野果林地区的特殊地理环境与气候;对新疆野苹果抗叶枯病病原菌链格孢菌的药效检测中,实验从植物生理状态(植物气孔,病斑大小等),酶活性与抗病相关基因表达水平等多方面证明该可湿性粉剂的施用可以提高新疆野苹果叶片对链格孢菌的抗性,为天山野果林新疆野苹果病害防治工作提供了新的依据。