肉种类掺假不仅违反了食品标识法、公平交易法和消费者保护法，还有宗教因素（回教和印度教），而且肉产品中含有未知种类还可能产生食物过敏和中毒，对消费者有着潜在的危害。目前在肉制品零售市场上，肉种类掺假是一个普遍存在的现象，尤其是熟肉制品的掺假发生率更高。由于价值低，颜色和组织相似，猪肉是价格较高的牛肉的潜在的掺假资源。　　 目前生肉鉴别方法已经比较成熟，而熟肉制品的鉴别方法比较复杂，蛋白质在加热期间会有所变化，如蛋白质变性、蛋白质的溶解度降低以及丧失抗原性，所以鉴别加工处理过的肉品种类是比较困难的。因此免疫分析法鉴定加热过的肉品种类或检测其掺假情况，必须以具有种属专一性的耐热性抗原或热稳定性肌肉蛋白质（thermostable muscle proteins，TSMPs）作为指标。据国外大量文献报道，猪骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ（Porcine skeletal muscle troponin I，PsTnI）是猪肉所特有的一种蛋白质，可以作为一种耐热种类标志蛋白（thermostable species marker protein），区分于其他熟肉制品的肉种类来源。　　 本试验运用原核表达系统获得重组猪骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ，分别制备兔抗猪慢骨骼肌亚型肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体和抗猪慢骨骼肌亚型肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体，为今后建立检测熟猪肉的夹心ELISA检测方法提供可靠的生物学材料，尤其是检测价值较高的牛肉制品中的掺假猪肉奠定良好的基础。　　 本研究的主要内容包括：　　 1．猪骨骼肌TnI－fast/slow基因的克隆与表达。　　 根据Genbank中收录的Sus scrofa troponin Ⅰ（TNNI2）cDNA序列（DQ091303）和Sus scrofa troponin Ⅰ（TNNI1）cDNA序列（AY282922）分别设计合成了引物TnI－FP1/TnI-FP2和TnI－SP1/TnI-SP2，然后提取猪骨骼肌总RNA，利用RT-PCR方法扩增到TnI－fast和TnI-slow基因并克隆到pMD18-T载体上，对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定，BLAST比对结果：同源性达99％。分别构建了TnI-fast和TnI－slow基因的原核表达质粒（pKG-Tn1－fast、pKG－TnI-slow和pET-32a-TnI－fast），并在E．coli BL21（DE3）中成功获得了表达，对表达产物进行SDS－PAGE电泳分析，分别出现了分子量大小为47KD、47KD和41KD的蛋白条带，与预期融合蛋白GST-TnI-FAST、GST-TnI－SLOW和HIS-TnI-SLOW的分子量大小一致。而且Western－blotting分析表明表达产物GST-TnI-FAST和GST-TnI－SLOW融合蛋白具有良好的生物学活性，为今后的研究奠定了坚实的基础。　　 2．兔抗猪慢骨骼肌亚型肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体的制备与纯化。　　 将纯化的重组蛋白GST－TnI－SLOW作为免疫原，通过设计好的免疫程序，成功制备了兔抗重组蛋白GST-TnI－SLOW的高免血清。对所得高免血清分别采用饱和硫酸铵粗提和Sephadex G－200过柱纯化，最后得到了纯化的兔抗重组蛋白GST-TnI-SLOW IgG。　　 3．抗猪慢骨骼肌亚型肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与纯化。　　 将纯化的融合蛋白GST-TnI－SLOW免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞，经过细胞融合，分别用纯化好的GST和HIS-TnI－SLOW作为筛选抗原进行双向负筛选和双向正筛选，成功获得了三株能稳定分泌抗TnI－SIOW蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞细胞株3C8，3H10，4H9。经小鼠腹腔接种获得的单抗效价均较高，3株针对HIS－TnI－SLOW的ELISA效价均在1：6.4×105以上，通过辛酸硫酸铵法提纯获得了纯度较高的单克隆抗体。　　 采用夹心ELISA方法来验证抗猪慢骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ（Porcine Skeletal TnI-SLOW McAb）单克隆抗体的特异性。实验结果表明夹心ELISA对100℃，30min处理过的猪肉样本显示阳性，而与其它动物肌肉样品没有明显的交叉反应性。证明本试验研制的针对猪慢骨骼肌亚型肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体和多克隆抗体具有动物种属特异性。