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目的:探讨重组人促红细胞生成素(Recombinanthumanerythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。
方法:采用改进的酶消化发培养新生SD大鼠视网膜Müller细胞,取3~4代时培养的细胞行免疫细胞化学染色鉴定。将体外培养大鼠视网膜Müller细胞随机分为高浓度葡萄糖培养组、对照组和各浓度rhEPO处理组,rhEPO处理组在高浓度葡萄糖培养液中分别加入终浓度为5、10、20、40kU/LrhEPO,培养48h后,用MTT法检测视网膜Müller细胞活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。
结果:免疫细胞化学染色显示,体外培养的细胞大部分GS染色阳性,该方法培养的大鼠视网膜Müller细胞纯度可达到95%以上。在高浓度葡萄糖条件下,体外培养的视网膜Müller细胞与对照组相比活性下降,且细胞大量凋亡,Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高。各浓度rhEPO组经rhEPO处理后与高浓度葡萄糖组相比细胞活力显著增强,并明显增强了Bcl-2蛋白的表达(P<0.05),降低Bax蛋白的表达(P<0.05).
结论:rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能显著增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。