CIDE-B基因启动子甲基化及mRNA表达水平与超重肥胖的关系

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目的:检测超重肥胖者和正常对照者外周血CIDE-B基因启动子序列甲基化水平及皮下和大网膜脂肪组织mRNA表达水平,探讨CIDE-B基因启动子区域甲基化程度及mRNA表达水平与超重肥胖的关系。方法:纳入患者均来自于医院腹部手术患者,手术前测定身高、体重、腰围、臀围及基本的生化指标。排除孕妇、残障或精神障碍者、继发性肥胖者、恶性肿瘤患者及乙肝、艾滋病、结核等传染性疾病患者。采用2007年中国成人肥胖诊断标准,将研究对象分为超重肥胖组(BMI?24.0kg/m2)和正常组(18.5kg/m2?BMI<24 kg/m2)。采用质谱法检测启动子甲基化,研究对象共116例,其中超重肥胖组66例,正常组50例,均于手术前抽取清晨空腹外周静脉血2ml,用EDTA-K2抗凝,经3000rpm离心10min分离血浆和细胞后于-80摄氏度冰箱保存待测;采用荧光定量PCR检测mRNA表达水平,纳入研究对象106例,其中超重肥胖组60例,正常组46例,研究对象在全麻情况下施行手术,打开腹膜分别取2g皮下和大网膜组织,并立即用无菌的生理盐水进行冲洗,装在2ml的冻存管内,置液氮中保存。用IBM SPSS Statistics 21.0软件进行数据分析,组间差异采用两独立样本的t检验或Mann-Whitney U检验,计数资料采用?2检验,CpG位点甲基化水平对BMI的影响程度分析采用多重线性回归,皮下和大网膜脂肪组织目的基因表达量差异采用配对t检验或Wilcoxon符号秩和检验,检验水准α=0.05。结果:1、本次sequenom质谱法共检测出CIDE-B基因启动子序列21个CpG位点存在甲基化。两独立样本t检验结果显示,正常组与超重肥胖组间该基因各CpG位点甲基化水平差异无统计学意义(P>0.05);甲基化水平最高的是CpG4.5(0.65±0.06),最低的是CpG15(0.04±0.05);多重线性回归结果显示,超重肥胖组BMI受CIDE-B基因CpG14位点甲基化水平(?=-51.60,P<0.05)影响,腰臀比受性别(?=-0.05,P<0.05)和CpG30位点甲基化水平(?=-1.15,P<0.05)影响。2、皮下脂肪组织CIDE-B基因mRNA的相对表达量是大网膜脂肪组织的1.93倍(皮下脂肪组织△Ct=2.34±1.80,大网膜脂肪组织△Ct=1.40±1.04),配对t检验结果显示,差异有统计学意义(t=4.52,P<0.05);皮下脂肪组织中,60例超重肥胖者CIDE-B基因mRNA的相对表达量是46例正常者的0.84倍(正常组△Ct=0.88±1.48,超重肥胖组△Ct=1.14±1.16),两独立样本t检验结果显示差异无统计学意义(t=1.54,P>0.05);大网膜脂肪组织中,60例超重肥胖者CIDE-B基因mRNA的相对表达量是46例正常者的1.72倍(正常组△Ct=2.22±1.55,超重肥胖组△Ct=1.44±0.99),两独立样本t检验结果显示差异有统计学意义(t=-2.38,P<0.05)。3、大网膜脂肪组织中,舒张压大于80mmHg的研究对象该基因的相对表达量是舒张压小于80mmHg的1.01倍,且差异有统计学意义(P<0.05);皮下脂肪组织中,TG含量高的研究对象目的基因相对表达量是TG含量低的1.20倍,差异有统计学意义(P<0.05);高HDL目的基因相对表达量是低HDL的0.76倍,差异有统计学意义(P<0.05);高LDL目的基因相对表达量是低LDL的1.11倍,差异有统计学意义(P<0.05)。4、多重线性回归结果显示,CpG19位点甲基化水平对目的基因mRNA在大网膜脂肪组织中表达的影响有统计学意义(?=-14.82,P<0.05),皮下脂肪组织中,CpG2位点甲基化水平对目的基因mRNA表达的影响有统计学意(?=-12.40,P<0.05)。结论:CIDE-B基因启动子序列存在异常甲基化状态,且甲基化程度越高,BMI和腰臀比越小;CIDE-B基因的高表达可能导致TG含量升高,HDL水平降低,LDL水平升高;大网膜脂肪组织中超重肥胖者CIDE-B基因mRNA表达量高于正常组,提示内脏大网膜脂肪蓄积与肥胖关系更加密切;CIDE-B启动子甲基化水平越低,mRNA的表达量越高。
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