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生长激素（Growth hormone.GH）是脊椎动物下丘脑分泌的单链多肽激素，鱼类生长激素参与鱼体的生长、发育和代谢等。鱼类脑垂体中天然生长激素含量极低，分离纯化比较困难，基因工程技术为生产大量廉价的鱼生长激素创造了条件。实验证明，重组鱼生长激素具有天然生长激素的功能，因此，生产基因重组鱼生长激素在水产养殖领域具有重要的应用价值。本论文成功实现了鲤鱼生长激素（Cyprinus carpio GH,cGH）在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的胞内表达和分泌表达。1 cGH在毕赤酵母细胞内的表达 根据cGH cDNA两端序列改造、设计一对引物。以cGH cDNA的克隆载体pUC18/GH为模板，扩增cGH成熟肽cDNA，克隆入酵母整合型胞内表达载体pHIL-D2的EcoR I位点，转化大肠杆菌，获得重组表达质粒pHIL-D2-GH（pD2-GH），酶切线性化，用电脉冲法转化组氨酸缺陷型（HIS4~-）毕赤酵母菌GS115，用MD培养基筛选转化子，MM培养基筛选转化子的表型，提取转化子基因组DNA，用PCR鉴定重组菌株。在MGY培养基中培养，甲醇诱导，收集菌体，破碎细胞，取上清，SDS-PAGE分析，检测到与标准cGH对应的特异蛋白带，重组cGH在细胞总蛋白中的含量约为2-3％。Westernblotting显示，表达产物有免疫活性。将重组工程菌作为饲料添加剂投喂罗非鱼，实验鱼的体重生长率明显高于对照组，证明重组cGH能促罗非鱼的生长。2 cGH在毕赤酵母中的分泌表达 将cGH成熟肽cDNA克隆到分泌表达载体pPICZa A，构建重组表达质粒pPICZaA-GH，转化毕赤酵母GS115菌株，YPDZ培养基筛选重组子，经培养和诱导表达，取培养基上清进行SDS-PAGE分析，结果表明，cGH分泌至培养基中。诱导3天时cGH表达量最高，表达的cGH占培养基上清总蛋白的36.41％，表达量为300-400mg/L。不同pH值实验表明，cGH表达的最适pH值为6.0。表达产物用阴离子交换层析分离纯化，纯化的cGH注射罗非鱼，实验初步显示分泌表达的cGH具有促进罗非鱼生长作用。