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猪是一种在转基因生物反应器领域有着广阔应用前景的理想动物模型，需要建立一套有效的体外繁殖技术为转基因猪生产提供大量高质量的成熟卵母细胞和胚胎。本研究以建立猪细胞克隆前期激活体系和体外胚胎生产为目的，系统的研究了卵母细胞成熟体系、体外孤雌激活体系、体外受精体系和冷冻方法。结果表明：每月的各级卵巢百分比走势：一级卵巢比例随着天气的变热逐渐减少，到六、七月达到低谷；二级卵巢比例相对受气候变化影响较低整体上走势都比较平稳；三级卵巢比例则走势正好与一级相反；每个卵巢采卵平均数在六月至九月处于低水平，在气候凉爽的四、五、九、十月的卵巢质量和检卵平均数比较高。卵母细胞后半程成熟培养体系中有无激素对卵母细胞的成熟率影响差异不显著(P＜0.01)；卵母细胞成熟培养时，细胞浓度为100个／400μl的成熟率最佳；不同成熟体系的成熟培养效果以NCSU-23+10％FBS为最佳；而卵母细胞激活后发育培养体系以NCSU-23+BSA卵母细胞发育的培养效果更好。用CRY-3细胞激活仪进行电激活时，脉冲电压应小于等于200V，脉冲时程可为20μs、40μs、80μs，脉冲次数应低于3次，其中以120v／20μs／1次，150v／20μs／2次两组的激活效果最佳。电激活(150v／20μs／2次)与几种化学激活(5μg／mlCB；CB+2mM／L6-DMAP；CB+150μM／Lγ-BLI)联合使用时，以电+CB+γ-BLI联合激活效果最好；比较γ-BLI几个浓度梯度的激活效果发现，以γ-BLI浓度为600μM组的激活效果最为理想。冷冻精液IVF，多精入卵率随着共孵时间或精子浓度的增长而增加，精卵共孵6h的受精效果最为理想。以解冻后活力为0.1左右的冷冻精液进行体外受精时，精子浓度以10~7为宜。两种不同卵母细胞成熟培养基与受精前两种不同卵母细胞去除卵丘处理方法联合作用表明，部分去除卵丘组优于完全去净组，其中以NCSU-23+FBS+部分去除卵丘组的IVF后发育效果最佳。鲜精的体外受精效果，优于冷冻后的精液，但除8-细胞率(78.01±1.53％vs68.09±1.08％)外，各项指标差异都不显著(P＞0.05)。用三种冷冻方法(OPS法；自制移液枪头法；移液枪头法+离心法)对MⅡ卵母细胞冷冻的结果表明，自制移液枪头法优于OPS法，其中以移液枪头法+离心组的冷冻效果最好；用移液枪头法对体外发育到8-细胞期卵母细胞的冷冻效果不理想。MⅡ期卵母细胞用OPS法冷冻后卵母细胞IVF和电激活的卵裂率都显著高于移液枪头法(P＜0.01)，电激活后2-细胞卵裂率比IVF高。本试验推荐猪体外成熟培养体系为连续培养液48h的NCSU-23+10％FBS，细胞浓度为100个／400μl，发育培养体系为NCSU-23+BSA；用CRY-3细胞激活仪电激活时(电融槽宽度为1mm)为150v／20μs／2次+600μMγ-BLI；以活力为0.1左右的冷冻精液进行IVF时，精子浓度为10~7，共孵时间为6h，并在成熟处理时只部分去除卵丘细胞；MⅡ卵母细胞冷冻时，方法为移液枪头法+离心法，冷冻后激活的2-细胞卵裂率比IVF高。季节对卵母细胞质量和采卵平均数影响显著(P＜0.05)。