L型金黄色葡萄球菌与胆囊癌相关性研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lsw19880811
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目的:探讨人类胆囊癌的发生是否与L型金黄色葡萄球菌有关。方法:1、运用青霉素纸片法诱导出稳定L型金黄色葡萄球菌;2、用L型金黄色葡萄球菌作用GBC-SD细胞(胆囊癌细胞),L型菌与GBC-SD细胞比值为100:1,通过光学显微镜检测L型金黄色葡萄球菌对体外培养的GBC-SD细胞的粘附作用,电镜观察以及PCR检测L型金黄色葡萄球菌是否能够进入GBC-SD细胞;3、用不同浓度的稳定L型金黄色葡萄球菌作用GBC-SD细胞,L型菌与GBC-SD细胞比值为1:10、1:1、10:1、100:1的情况下分别作用1、2、4天,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)检测稳定L型金黄色葡萄球菌对GBC-SD细胞增殖的影响;稳定L型金黄色葡萄球菌与GBC-SD细胞比为100:1的情况下分别作用3h、6h、12h、24h、48h,通过流式细胞术、DNA Ladder法检测稳定L型金黄色葡萄球菌对GBC-SD细胞凋亡的影响;4、采用Human U133 Plus 2.0基因表达谱芯片比较稳定L型金黄色葡萄球菌作用后的GBC-SD细胞基因表达的改变,并对基因芯片中的差异基因采用RT-PCR方法验证。结果:1、经过青霉素纸片法诱导传18代后成功获得稳定L型金黄色葡萄球菌,在无青霉素的L型培养基中传3代均未出现回复;2、光学显微镜观察到L型金黄色葡萄球菌能够粘附于体外培养的GBC-SD细胞,电镜观察以及PCR检测证明L型金黄色葡萄球菌能够进入GBC-SD细胞;3、不同浓度的稳定L型金黄色葡萄球菌作用4天均可促进GBC-SD细胞增殖(P<0.05),L型菌与GBC-SD细胞比值为1:10、1:1、10:1、100:1促进的增殖率分别为16.7%、19.2%、13.7%、24.1%,不同浓度的L型菌作用细胞促进增殖效果无明显差异(P>0.05);稳定L型金黄色葡萄球菌与GBC-SD细胞比为100:1的情况下分别作用3h、6h、12h、24h、48h均未促进凋亡,其对照金黄色葡萄球菌及其不稳定L型均会促进细胞凋亡,并且不稳定L型金黄色葡萄球菌促进的凋亡低于金黄色葡萄球菌;4、基因芯片结果表明经过稳定L型金黄色葡萄球菌作用后的GBC-SD细胞有20个基因出现变化,其中基因表达上调有4个,Genebank ID为AK024454、AK021539、AI871627、AW299815。基因表达下调有16个,Genebank ID为AI985407、BC041998、BC035193、NM001393、L31792、M81778、AF006623、NM025134、NM023921、AW117584、AK023065、AK025063、R44298、BE463757、AW873604、AA018404。取上调基因(ID为AK024454)表皮生长因子类似含粘蛋白类似与激素受体2(EMR2)、下调基因(ID为NM001393)细胞外基质蛋白2(ECM2)进行RT-PCR法验证(P<0.05),与基因芯片结果符合。结论:L型金黄色葡萄球菌能够进入GBC-SD细胞,稳定L型金黄色葡萄球菌能够促进GBC-SD细胞增殖,不促进细胞凋亡,而不稳定L型金黄色葡萄球菌与金黄色葡萄球菌均能促进GBC-SD细胞凋亡,基因芯片表明稳定L型金黄色葡萄球菌能够促使GBC-SD细胞EMR2基因表达上调、ECM2基因表达下调,提示L型金黄色葡萄球菌可能与胆囊癌的发生、发展存在一定的相关性。
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