西瓜嗜酸菌趋化性测定及趋化基因cheA和cheY功能研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fakemario
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瓜类细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch,简称BFB)是世界范围的检疫性细菌病害,主要为害西瓜、甜瓜等葫芦科作物,造成重大的经济损失。西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli,Schaad et al,2008)是其病原菌,有研究表明病原细菌在寄主表面的定殖能力与其致病能力关系密切,而病原细菌的趋化能力是决定定殖能力的关键因素之一。本研究主要围绕西瓜嗜酸菌的趋化性测定及其趋化基因的功能展开,主要结果如下:1、初步测定西瓜嗜酸菌Ac-5菌株的趋化性利用毛细管法测定碳源、氨基酸、有机酸等对西瓜嗜酸菌趋化性的影响。结果发现:麦芽糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖和半乳糖显著促进西瓜嗜酸菌的趋化性;L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-脯氨酸、L-谷氨酸和L-谷氨酰胺显著促进西瓜嗜酸菌的趋化性,而L-蛋氨酸显著抑制其趋化性;柠檬酸和苹果酸显著促进西瓜嗜酸菌的趋化性;氯化钠、硫酸镁等对西瓜嗜酸菌的趋化性无显著影响。2、Ac-5菌株趋化基因che A和che Y的生物信息学分析登录NCBI数据库西瓜嗜酸菌全基因序列查找che A和che Y基因的相关信息。che A和che Y基因分别编码Che A和Che Y蛋白。Che A和Che Y蛋白均存在多个疏水性氨基酸区域;Che A蛋白是一种跨膜蛋白,在600-700氨基酸处(即Che W结合区域)有跨膜结构,Che Y蛋白不存在跨膜结构,是一种膜内蛋白,用于接收Che A蛋白的信号;西瓜嗜酸菌Che A蛋白与青枯菌的Che A蛋白亲缘关系最近,和荧光假单胞菌的亲缘关系最远。3、Ac-5菌株趋化基因che A和che Y3的功能研究构建Δche A和Δche Y3基因缺失突变株以及Cche A互补菌株,并进行表型分析。结果发现:Δche A和Δche Y3基因缺失突变株与野生型菌Ac-5相比,趋化及运动能力下降;在种子表面的定殖能力下降;病株病情指数先下降后恢复野生型菌株Ac-5水平;生物膜形成能力增强;引起非寄主烟草的过敏性反应。4、che A基因缺失对其他基因表达量的影响利用荧光定量PCR分析che A基因缺失对其他基因表达量的影响。结果显示che A基因在突变株中不表达,T3SS中hrc N和hrp E基因,毒性蛋白trb C和vir B基因,鞭毛合成基因mot A和动力蛋白基因fli M以及信号接收蛋白基因che Y1均上调表达。
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